1、對于目前頻繁爆發(fā)的細(xì)菌性疾病，藥物治療有很多弊端，相比而言疫苗接種對養(yǎng)殖環(huán)境和人類健康是安全的，因此被認(rèn)為是防治細(xì)菌性疾病的最重要方法之一。本研究針對華南地區(qū)淡、海水養(yǎng)殖魚類頻繁發(fā)生的海豚鏈球菌病，以其主要病原海豚鏈球菌的疫苗為研究對象，主要進(jìn)行了海豚鏈球菌的滅活條件研究、疫苗用菌株的篩選、疫苗用抗原濃度的篩選、羅非魚對不同佐劑海豚鏈球菌滅活苗的免疫應(yīng)答的研究，為海豚鏈球菌疫苗的推廣和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 為建立海豚鏈球菌疫苗的工廠化

2、生產(chǎn)工藝，研究了疫苗的福爾馬林滅活條件，從時(shí)間和疫苗的安全性角度來講，28℃下，0.3～0.5﹪的福爾馬林濃度滅活菌液是較合適的。這些參數(shù)為海豚鏈球菌滅活苗的大規(guī)模生產(chǎn)提供重要理論依據(jù)。 對疫苗的免疫保護(hù)性的評價(jià)主要從疫苗誘導(dǎo)的特異性抗體效價(jià)水平(包括用微量凝集反應(yīng)、ELISA法)以及魚體對人工攻毒的相對保護(hù)率(relative percentsurvival，RPS)兩方面進(jìn)行評價(jià)。結(jié)果表明，抗體效價(jià)值與累積死亡率呈顯著的負(fù)相

3、關(guān)(p<0.05)。 本研究比較了淡水株TBY-1、TBY-5與海水株HD-1、HD-4四個(gè)菌株佛氏佐劑滅活苗對羅非魚的免疫效果：免疫組抗體效價(jià)顯著高于對照組(p<0.05)，死亡率顯著低于對照組(p<0.05)；其中淡水株TBY-1免疫組的免疫保護(hù)性(微量凝集反應(yīng)測定最高抗體效價(jià)為1:64，RPS為100.0﹪)強(qiáng)于TBY-5；海水株HD-1免疫組的免疫保護(hù)性(微量凝集反應(yīng)測定最高抗體效價(jià)為1:64，RPS為93.6﹪)也強(qiáng)于

4、HD-4。認(rèn)為淡水株TBY-1、海水株HD-1作為免疫效果較佳的疫苗用菌株，可分別用于淡、海水魚類免疫實(shí)驗(yàn)；本研究之后試驗(yàn)均以TBY-1為試驗(yàn)菌株(HD-1株在海水魚中的試驗(yàn)由實(shí)驗(yàn)室同事完成)。為制備效果較佳的海豚鏈球菌疫苗，比較了三種不添加佐劑的海豚鏈球菌滅活苗(抗原濃度為10<'10>、10<'9>、10<'8>CFU×ml<'-1>)對羅非魚進(jìn)行一次免疫后攻毒與兩次免疫后攻毒所產(chǎn)生的免疫保護(hù)效果。結(jié)果表明，免疫一次的三組之間的免疫

5、效果無顯著性差異，能顯著高于對照組，但顯著低于免疫兩次的三組(p<0．05)。免疫效果最好的一組是10<'10>Ⅱ組(ELISA測定最高抗體效價(jià)1:566，保護(hù)率64．0﹪)。 基于不添加佐劑的滅活苗效果欠佳，本研究對佛氏、白油、鋁膠、白油+左旋咪唑(免疫增強(qiáng)劑)四種佐劑苗對羅非魚的免疫效果進(jìn)行比較，結(jié)果表明，佐劑組免疫效果顯著優(yōu)于不添加佐劑的六組。其中佛氏佐劑與白油佐劑免疫效果顯著優(yōu)于其它佐劑組，但佛氏佐劑價(jià)格昂貴、有較大副作

6、用，因此認(rèn)為白油佐劑(ELISA測定該免疫組最高抗體效價(jià)為1:2263，RPS為100．0﹪)是最可行的海豚鏈球菌疫苗佐劑之一。 為減少生產(chǎn)時(shí)間與開銷，本研究還比較了10<'10>、10<'9>、10<'8> CFU×ml<'-1>三個(gè)抗原濃度白油佐劑苗對羅非魚的免疫效果。10<'9>白油組抗體效價(jià)(1：1131)低于10<'10>白油組(1:2263)，顯著高于10<'8>白油組(1:400)(p<0．05)；10<'9>白油