1、隨著水產(chǎn)業(yè)集約化養(yǎng)殖的快速發(fā)展，魚類病害的發(fā)生日益頻繁、危害日趨嚴(yán)重，特別是細(xì)菌性疾病種類多、發(fā)病率和死亡率高，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，對頻繁爆發(fā)的細(xì)菌性疾病的治療尚主要依賴藥物，但細(xì)菌對藥物的抗藥性以及藥物的殘留問題給水產(chǎn)品安全造成了巨大危機(jī)。而疫苗接種對養(yǎng)殖動物疫病的防治被公認(rèn)為是最安全、有效的首選方法。為此，本文針對嚴(yán)重危害羅非魚養(yǎng)殖的鏈球菌病的免疫學(xué)防治展開研究，旨在為現(xiàn)代羅非魚的養(yǎng)殖提供有力的技術(shù)支撐。

2、 本研究制備了海豚鏈球菌(Streptococcus iniae)滅活疫苗，確定了不同佐劑疫苗對羅非魚的保護(hù)期；并從生物制品安全角度，對工廠化方式生產(chǎn)白油佐劑疫苗和鋁膠佐劑疫苗進(jìn)行了安全性檢測；同時，采用浸泡與注射相結(jié)合的接種方法免疫羅非魚，為S．iniae商品化滅活疫苗的普及奠定了基礎(chǔ)。 將S．iniae的HD-1株制備成白油、佛氏和濃度為4％的鋁膠佐劑滅活疫苗，腹腔注射接種羅非魚(1×109CFU×ml-1，0.1 ml×尾

3、-1)。經(jīng)過兩次免疫，每次免疫間隔14天，從初次免疫開始，每隔4周用HD-1株攻毒，一共攻毒6次，保護(hù)期試驗(yàn)持續(xù)期共計24周。統(tǒng)計攻毒14天內(nèi)各組魚的死亡情況，計算各免疫組的相對保護(hù)率(RPS)，并測定各組魚血清抗體效價的變化。結(jié)果表明：HD-1株白油佐劑滅活疫苗保護(hù)期在第二月時，保護(hù)率最高達(dá)到100％，最高血清抗體凝集效價在第二個月達(dá)到1：80；佛氏佐劑和4％的鋁膠滅活疫苗免保護(hù)率在一個月時達(dá)到最高，分別為73％和88.5％，因此在鏈

4、球菌病高發(fā)期的前兩個月注射白油佐劑疫苗，可達(dá)到較好的預(yù)防效果。 將S．iniae的TBY-1株制備成109CFU×ml-1白油和濃度為200％工廠化鋁膠滅活疫苗，對羅非魚分別注射0.1ml和2倍于正常劑量的疫苗。安全試驗(yàn)結(jié)果表明：白油佐劑滅活疫苗較為安全，未出現(xiàn)魚體死亡情況，但在觀察過程中，一些組織會出現(xiàn)輕微炎癥反應(yīng)，兩個月后白油在魚體仍有少量殘留。工廠化生產(chǎn)的濃度為20％鋁膠佐劑滅活疫苗可對羅非魚造成80％以上的死亡率。按照工

5、廠化的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，鋁膠佐劑并不適用于羅非魚的免疫。 采用浸泡/注射復(fù)合免疫接種的方法，在幼魚體長為2.5+0.5cm時，采用濃度為1×106 CFU×ml-1和1×107 CFU×ml-1的全細(xì)胞滅活疫苗分別浸泡羅非魚10min和30min，待魚長到40g時，仍然采用該種疫苗腹腔注射羅非魚(1×109CFU×ml-1，0.1ml×尾-1)，兩周后攻毒。結(jié)果表明：濃度為1×106CFU×ml-1和1×107 CFU×ml-1疫苗，浸