1、星形膠質細胞是中樞神經系統(tǒng)中細胞比例最大的一種細胞,它的標志性蛋白為膠質纖維酸性蛋白(GFAP)。我們人類GFAP基因位于17號染色體(17q21),編碼432個氨基酸。星形膠質細胞GFAPmRNA的主要亞型(GFAPα),轉錄產物為2.9kb,主要在中樞神經系統(tǒng)中表達,另外還存在四種亞型 GFAPβ,γ,δ和ε。GFAP蛋白屬于中間纖維中的第三型,第三型中間纖維結構上相當保守,由中間的α螺旋桿狀結構和兩邊非α螺旋的N端頭部和C端尾部組

2、成。
　　GFAP組成星形膠質細胞的骨架,調節(jié)星型膠質細胞的移動和形態(tài)變化。星形膠質細胞在中樞神經系統(tǒng)的作用有:對神經遞質的處理、對細胞外離子水平的控制、對神經細胞生長方向和數量的調節(jié)、對血腦屏障的維持和對免疫反應的調控。 GFAP的表達上調,象征著星形膠質細胞的活化增生。一般出現在炎癥刺激、神經損傷之后。更有臨床意義的是,神經退行性病變中即使輕微的神經元損傷也會出現GFAP反應性的表達上調。星形細胞的活化增生后形成膠質疤痕,這種

3、疤痕會阻礙損傷神經元的修復以及再生軸突的延伸,嚴重影響了神經修復和肢體功能的改善。
　　米諾環(huán)素(minocycline)是一種人工合成的四環(huán)素類衍生物,臨床上常常作為抗生素用于痤瘡等疾病的治療。近年來,米諾環(huán)素展示了許多其他方面的作用,包括抑制Caspase-1和Caspase-3,它們分別參與白介素-1的生成和細胞凋亡。米諾環(huán)素也可以抑制誘導的NO合酶產生NO并且可以減弱小膠質細胞的活性。米諾環(huán)素還可以抑制對中樞神經系統(tǒng)有諸多

4、毒害作用的金屬蛋白酶(MMPs)。米諾環(huán)素可作為一種多用途藥物,治療靶點為參與調節(jié)細胞死亡和脊髓損傷后繼發(fā)性損害發(fā)展的多種過程。米諾環(huán)素具有高度的脂溶性可以穿過血腦屏障,阻止天冬氨酸蛋白水解酶上調。米諾環(huán)素不僅會調節(jié)神經元的凋亡過程,還可以調節(jié)各類膠質細胞之間的相互作用,尤其是小膠質細胞和星型膠質細胞之間的作用。關于米諾環(huán)素的神經保護作用還在不斷的被探索、發(fā)掘。
　　盡管,米諾環(huán)素在神經損傷中的作用被許多研究所證實,但目前MINO

5、的促進神經修復的作用仍未被完全闡明,而星形膠質細胞活化在脊髓損傷的病理過程發(fā)揮著怎樣的作用也有待進一步探索。
　　本實驗目的是在制備不完全脊髓損傷模型的基礎上,觀察MINO對不完全脊髓損傷模型的促進恢復作用以及使用MINO前后GFAP表達水平的變化,并根據實驗結果推測MINO的作用機理和星形膠質細胞在脊髓損傷中的作用機制。
　　本實驗觀察并記錄了大鼠行為學的變化過程,采取免疫熒光方法和實時定量 PCR方法,分別檢測了3組大鼠

6、損傷脊髓損傷點 GFAP蛋白的表達情況和mRNA的變化情況。動物行為學觀察結果顯示,SHAM組行為學表現良好,BBB評分基本為21分;損傷+NS組行為學表現較差,BBB評分在術后3、7、14天都分別低于損傷+MINO治療組;損傷+MINO治療組行為學表現優(yōu)于NS組,術后BBB評分也明顯高于NS組。各組大鼠均有脊髓損傷點橫斷面GFAP免疫陽性表達。其中損傷+NS組免疫反應明顯增強,而損傷后經過MINO治療組的大鼠免疫反應較 NS組明顯減弱

7、(P<0.05)。Real-time PCR結果顯示,與 SHAM組相比,INJURY+NS組和INJURY+MINO組GFAP表達明顯升高,但MINO治療組和NS組相比,GFAPmRNA表達明顯降低(P<0.05)。免疫熒光所示形態(tài)學上GFAP的表達變化與Real-time PCR一致,MINO治療不完全脊髓損傷大鼠,脊髓內GFAP反應陽性星形膠質細胞的數目以及mRNA的相對含量均比NS組明顯降低。
　　以上結果說明,MINO能