1、目的:1.觀察首烏益智膠囊對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移、管狀結(jié)構(gòu)形成的影響,及對VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA的影響,從而驗證首烏益智膠囊是否能誘導血管內(nèi)皮細胞血管新生,并探討其可能機制。2.通過觀察首烏益智膠囊對血管性認知障礙模型大鼠缺血腦組織微血管密度的影響,探討首烏益智膠囊促血管新生的療效。3.觀察首烏益智膠囊對大鼠缺血腦組織VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA表達的影響,探討首烏益智

2、膠囊促進具有穩(wěn)定功能的血管新生的信號調(diào)控機制。方法:1.培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞,隨機分為空白對照組、尼莫地平組(尼莫地平含藥血清)、首烏益智膠囊組(首烏益智膠囊含藥血清),分組用藥,采用MTT法、劃痕損傷實驗、管樣結(jié)構(gòu)生成實驗等檢測內(nèi)皮細胞增殖、遷移和管樣結(jié)構(gòu)生成;采用實時定量PCR檢測HUVECs細胞VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA表達。2.以Wistar大鼠為實驗對象,采用大腦中動脈缺血再灌注法建立血管性認知障礙

3、動物模型。將造模成功大鼠,隨機分為假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組(0.81mg/100g/d)、首烏益智膠囊組(54mg/100g/d),每組20只,造模后藥物干預4周,Morris水迷宮試驗檢測各組大鼠行為學改變,免疫組化檢測CD34表達觀察缺血周圍腦組織微血管密度的改變,電鏡觀察腦血管內(nèi)皮細胞的超微結(jié)構(gòu)變化,實時熒光定量PCR檢測缺血腦組織VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4基因表達。結(jié)果:1.離體實驗結(jié)果(1)首烏益智膠囊

4、對人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖、遷移、管狀結(jié)構(gòu)形成的影響:首烏益智膠囊組OD值為0.99±0.03,明顯高于空白對照組的0.54±0.02(p＜0.01);首烏益智膠囊組遷移率為94.83％,明顯高于空白對照組的70.94%(p＜0.01);高倍視野(200×)隨機計算6個視野下形成的管腔個數(shù),首烏益智膠囊為23.42±2.83,明顯高于空白對照組的15.23±3.44(p＜0.01)。(2)首烏益智膠囊對人臍靜脈內(nèi)皮細胞VEGF、Ang-1、

5、Tie-2、Notch4mRNA的影響:空白對照組、尼莫地平組、首烏益智膠囊組的VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA水平依次升高。與空白對照組比較,尼莫地平組和首烏益智膠囊組有顯著性差異(p＜0.01, p＜0.05);與尼莫地平組比較,首烏益智膠囊組Ang-1、Notch4mRNA表達有顯著性差異(p＜0.05),首烏益智膠囊組VEGF、Tie-2mRNA表達無顯著性差異(p＞0.05)。2.在體實驗結(jié)果(1)首烏益

6、智膠囊對VCI模型大鼠學習記憶能力的影響:水迷宮結(jié)果表明,首烏益智膠囊組大鼠的定位航行和空間探索實驗測試成績明顯優(yōu)于模型組和尼莫地平組(p＜0.01, p＜0.05)。(2)首烏益智膠囊對缺血周圍腦組織微血管密度的影響:模型組、尼莫地平組、首烏益智膠囊組較假手術(shù)組依次升高;各組與假手術(shù)組相比,有顯著性差異(p＜0.01,p＜0.05);與模型組比較,尼莫地平組、首烏益智膠囊組有顯著性差異(p＜0.01, p＜0.05);與尼莫地平組比較

7、,首烏益智膠囊組差異無顯著性(p＞0.05)。(3)首烏益智膠囊對VCI模型大鼠腦血管內(nèi)皮細胞超微結(jié)構(gòu)的影響:模型組缺血側(cè)微血管內(nèi)皮細胞胞質(zhì)以及毛細血管周圍高度水腫,血管內(nèi)皮細胞內(nèi)線粒體數(shù)目減少,線粒體的大部分嵴融合消失,部分核膜融合消失。首烏益智膠囊組和尼莫地平組:鏡下表現(xiàn)較模型組均有明顯改善,毛細血管周圍水腫較模型組輕,基膜基本正常,血管內(nèi)皮細胞可見較多的線粒體,已接近正常狀態(tài)。以首烏益智膠囊組對內(nèi)皮水腫改善最為顯著。(4)首烏益智

8、膠囊對VCI模型大鼠缺血腦組織VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA的影響:模型組VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4、DLL4mRNA水平較假手術(shù)組大鼠升高,差異有顯著性(p＜0.05)。尼莫地平組和首烏益智膠囊組VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA水平與模型組有明顯升高(p＜0.01, p＜0.05);首烏益智膠囊組VEGF、Ang-1、Notch4mRNA表達升高,與尼莫地平組相比存在顯

9、著性差異(p＜0.05);首烏益智膠囊組Tie-2mRNA表達升高,與尼莫地平組相比無顯著性差異(p＞0.05)。結(jié)論:1.首烏益智膠囊能促進人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖、遷移、管狀結(jié)構(gòu)形成,從而具有促進血管新生的療效。首烏益智膠囊可能通過上調(diào)VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4基因的表達發(fā)揮促血管新生的療效。2.首烏益智膠囊能明顯提高VCI模型大鼠缺血腦組織微血管密度,促進血管新生。VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4基因