1、目的:觀察過氧化氫H2O2誘導(dǎo)的擬帕金森病細(xì)胞損傷模型中,丙酮酸乙酯EP是否對其具有保護(hù)作用;并探討此保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　方法:過氧化氫處理人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y模擬帕金森病細(xì)胞損傷模型。首先采用MTT方法檢測細(xì)胞活力水平;免疫熒光法檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧水平;免疫印跡western blotting法檢測Bcl-2和Bax含量,分析其比值;最后用Hoechst33258對細(xì)胞進(jìn)行染色,觀察正常對照組和H2O2處理組細(xì)胞核的

2、形態(tài)變化。
　　結(jié)果:MTT檢測細(xì)胞活力發(fā)現(xiàn),過氧化氫處理細(xì)胞24小時后能夠顯著降低細(xì)胞活力水平,對神經(jīng)細(xì)胞有顯著毒性作用。而丙酮酸乙酯可以有效的提高這種被損傷細(xì)胞活力。0.1-5mM濃度的丙酮酸乙酯對細(xì)胞沒有明顯損傷作用。細(xì)胞內(nèi)活性氧水平檢測發(fā)現(xiàn),H2O2處理組細(xì)胞內(nèi)氧化水平明顯升高,而丙酮酸乙酯EP能明顯減少這種氧化反應(yīng)。western blotting檢測發(fā)現(xiàn),H2O2處理組細(xì)胞內(nèi)Bcl-2表達(dá)下降,而Bax表達(dá)升高。而加入

3、EP后,Bcl-2和Bax呈相反改變,Bcl-2/Bax比值上升。Hoechst33258染色的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),與對照組相比,過氧化氫處理組細(xì)胞呈現(xiàn)熒光強(qiáng)度增強(qiáng)、核固縮,細(xì)胞數(shù)目明顯減少;EP治療后,發(fā)生凋亡細(xì)胞數(shù)目較少。
　　結(jié)論:過氧化氫處理人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y后細(xì)胞發(fā)生了生化和形態(tài)學(xué)的改變,并導(dǎo)致凋亡。而丙酮酸乙酯可以顯著減輕這種改變。說明丙酮酸乙酯可以保護(hù)過氧化氫對SH-SY5Y產(chǎn)生的毒害作用。其機(jī)制可能是