1、本實驗重點是在新建胚胎實驗室建立與優(yōu)化牛卵母細(xì)胞及胚胎體外操作技術(shù)體系，進(jìn)一步推動生物胚胎工程的發(fā)展，并為牛的體細(xì)胞克隆和轉(zhuǎn)基因牛的研究打下基礎(chǔ)。為此，從屠宰場收集卵巢，采集卵巢表面直徑為2.8mm卵泡的卵母細(xì)胞，以TCM199添加20％FBS為基礎(chǔ)液，對其進(jìn)行成熟培養(yǎng)，研究FSH/LH17β-E<,2>/EGF濃度、卵巢的運輸時間和保存溫度、卵母細(xì)胞采集方法、卵巢所處生理狀態(tài)等對牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響；研究了孤雌激活體系與牛卵母細(xì)胞

2、在藥物中作用時間對牛卵母細(xì)胞孤雌激活的影響；研究了受精體系與成熟卵母細(xì)胞受精前的處理方法對牛卵母細(xì)胞體外受精的影響：還研究了胚胎體外培養(yǎng)體系對牛胚胎體外發(fā)育的影響。結(jié)果表明： 1．在新建胚胎實驗室建立了牛卵母細(xì)胞的體外成熟體系。在屠宰場選擇處于卵泡期的奶牛和黃牛卵巢，保存在30℃生理鹽水中4h內(nèi)運送回實驗室，采用抽吸法采卵，采用成熟液 Tissue Culture Medium-199(Earle's)液+20％FBS+50 μ

3、g/ml LH+50μg/ml FStH+20μg/ml 17β-E<,2>對A、B級卵母細(xì)胞進(jìn)行體外成熟，24小時成熟率可達(dá)80％。 2．EGF能顯著提高牛卵母細(xì)胞的成熟率，且隨著EGF添加量的不斷增加牛卵母細(xì)胞的成熟率也呈上升趨勢，添加50μg/ml時，成熟率可達(dá)到82.2％。但由于藥品昂貴，未繼續(xù)做大劑量添加的比較。 3．牛卵母細(xì)胞的孤雌激活條件為5mmol/L離子霉素作用5min，2mmol/L，6-DAMP作用