1、研究背景：
　　角膜透明是以低水平的血管生成因子和高水平的抗血管生成因子為基礎(chǔ)。角膜組織內(nèi)新生血管的增生使角膜失去正常的透明性,是導(dǎo)致視力減退甚至致盲的一個(gè)重要原因。角膜新生血管的形成是堿燒傷的顯著特點(diǎn)之一,與視力喪失的關(guān)系極為密切。
　　它所引起的眼盲已成為眼科學(xué)目前面臨的問(wèn)題之一[2]。而角膜炎癥,角膜化學(xué)燒傷產(chǎn)生的病理性角膜新生血管[1]同時(shí)也是同種異體角膜移植術(shù)后發(fā)生排斥反應(yīng)的高危因素。盡管目前治療方法很多,如糖皮質(zhì)

2、激素肝素,環(huán)孢素A,非甾體抗炎藥,沙立度胺,氨甲喋呤[3-6]等,但仍缺乏一種十分安全有效的藥物治療。
　　目前糖皮質(zhì)激素是角膜新生血管的主要的治療藥物之一,但仍有致青光眼,白內(nèi)障等副作用,所以開發(fā)新型有效的角膜新生血管抑制藥物具有重大意義。
　　目的：
　　分別建立家兔角膜堿燒傷模型和縫線誘導(dǎo)新生血管的方法,同時(shí)比較觀察應(yīng)用Avastin滴眼液和含激素滴眼液兩種不同藥物方法在不同時(shí)期抑制角膜新生血管的效果,從而為臨床

3、尋找一種既簡(jiǎn)單易行,又經(jīng)濟(jì)有效的角膜新生血管治療方法;臨床收集24例(31眼)角膜新生血管病例,觀察應(yīng)用Avastin滴眼液對(duì)人角膜新生血管的抑制作用和安全性。
　　方法實(shí)驗(yàn)一:
　　Avastin滴眼液對(duì)兔角膜堿燒后角膜新生血管形成的抑制作用(1)以堿燒傷法(1mol/LNaOH溶液)誘導(dǎo)角膜新生血管的生成;(2)各組均于堿燒傷后第7d給予相應(yīng)藥物滴眼,4次/d,共14d;(3)通過(guò)裂隙燈觀察并記錄堿燒傷后第7d、14d、

4、28d、56d角膜情況,拍照計(jì)算角膜新生血管面積;免疫組織化學(xué)法檢測(cè)角膜組織中VEGF蛋白的表達(dá);RT-PCR法檢測(cè)角膜組織中VEGFmRNA的表達(dá);酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)房水內(nèi)VEGF的表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)二:
　　Avastin滴眼液對(duì)兔角膜縫線后角膜新生血管形成的抑制作用(1)以縫線法誘導(dǎo)角膜新生血管的生成;(2)、(3)均與實(shí)驗(yàn)一相同。
　　實(shí)驗(yàn)三:
　　Avastin滴眼液對(duì)人角膜新生血管形成的抑制作用(1

5、)納入符合標(biāo)準(zhǔn)的病人,告知并自愿接受治療;(2)給藥:Avastin滴眼液,4次/d,共14d。(3)用藥第7d、14d時(shí)通過(guò)裂隙燈觀察并記錄角膜情況,拍照計(jì)算角膜新生血管面積;觀察并詢問(wèn)病人用藥后情況,評(píng)價(jià)安全性。
　　結(jié)果:
　　實(shí)驗(yàn)一:
　　(1)成功制備兔角膜堿燒傷后新生血管模型;(2)給予各組不同藥物治療14d后,不同時(shí)間點(diǎn)Avastin組角膜新生血管均明顯較對(duì)照組短而稀疏;RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,在傷后2

6、1d、28d時(shí),Avastin組兔角膜組織內(nèi)VEGFmRNA的表達(dá)均較對(duì)照組低。56d時(shí),Avastin組兔角膜組織內(nèi)VEGFmRNA的表達(dá)較對(duì)照組高;ELISA法顯示,兔角膜房水中VEGF含量于21d時(shí)明顯低于對(duì)照組,說(shuō)明此藥物可有效滲透角膜,使房水中的VEGF含量下降。
　　實(shí)驗(yàn)二:
　　(1)成功制備兔角膜縫線法誘導(dǎo)新生血管模型;(2)給予各組不同藥物治療14d后,不同時(shí)間點(diǎn)Avastin組新生血管面積值與帕利百和對(duì)照

7、組均有顯著性差異;RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,在縫線后21d、28d時(shí),Avastin組兔角膜組織內(nèi)VEGFmRNA的表達(dá)均較對(duì)照組低。而56d時(shí),Avastin組兔角膜組織內(nèi)VEGFmRNA的表達(dá)較對(duì)照組高;ELISA法檢測(cè)兔角膜房水中VEGF的含量結(jié)果顯示:縫線后21d時(shí),Avastin組房水中的VEGF含量較帕利百和對(duì)照組均低。隨著時(shí)間的延長(zhǎng),傷后28d時(shí),三組房水中的VEGF含量趨于一致,統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)明顯差異;而縫線后56d時(shí),帕利百

8、和對(duì)照組房水中的VEGF含量較Avastin組突發(fā)性的增加,統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義。
　　實(shí)驗(yàn)三:
　　(1)納入符合標(biāo)準(zhǔn)病人24例,共31只眼。(2)31例患眼用藥7d、14d后角膜新生血管面積明顯減少,分別為用藥前的60.70±21.08％,40.26±21.52％。其中18眼視力有不同程度的提高。(3)31例患眼用藥后安全性評(píng)價(jià)計(jì)分均為0分,未觀察到角膜水腫、角膜上皮脫落、角膜潰瘍不愈合、虹膜睫狀體炎、虹膜萎縮及晶狀體損傷現(xiàn)象;

9、未出現(xiàn)皮膚過(guò)敏反應(yīng)和毒性損傷等全身不良反應(yīng)。
　　結(jié)論:
　　(1)角膜堿燒傷急性炎癥期過(guò)后,給予Avastin眼液滴眼可有效控制新生血管的生長(zhǎng),且在用藥后可減少新生血管面積。在停藥后短期內(nèi)觀察,未見新生血管面積的再增長(zhǎng)。
　　(2)對(duì)于縫線引起的角膜新生血管,Avastin眼液滴眼能控制并促使新生血管消退。但在停藥后,由于縫線刺激長(zhǎng)期存在,新生血管仍會(huì)繼續(xù)生長(zhǎng)。因此,提示不同刺激因素引起的角膜新生血管應(yīng)提供不同的用藥