1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文βcatenin在發(fā)育性髖關(guān)節(jié)脫位動(dòng)物模型早期軟骨退行性變中機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究姓名：寧波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：馬瑞雪20120401復(fù)旦大學(xué)博士論文退行性改變的影響18周對(duì)照組大鼠髖關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的提取及原代培養(yǎng)，工I型膠原免疫熒光及甲苯胺藍(lán)染色鑒定，免疫熒光及qRT—PCR檢測(cè)MMPl3及X型膠原的表達(dá)，qRT—PCR檢測(cè)ADAMTS5的表達(dá)，TUNEL法檢測(cè)軟骨細(xì)胞凋亡。2LiCl處理正常發(fā)育8周鼠關(guān)

2、節(jié)軟骨細(xì)胞，激活0一catenin的表達(dá)，qRT—PCR檢測(cè)X型膠原、刪P一13和ADAMTS5的表達(dá)；檢測(cè)軟骨細(xì)胞凋亡情況。3SPSS160統(tǒng)計(jì)和比較組間差異。[結(jié)果]一、DDH動(dòng)物模型的制作及病理組織學(xué)觀察1建模成功率100％(20只新生大鼠固定10天)。2髖關(guān)節(jié)大體觀察：實(shí)驗(yàn)組關(guān)節(jié)囊增厚，髖臼淺平，軟組織嵌入，股骨頭外形扁平，隨年齡增長(zhǎng)頭臼匹配差距增大；測(cè)量結(jié)果顯示2、4周大鼠髖臼及股骨頭大小較對(duì)照組發(fā)育小，但仍呈發(fā)育增大趨勢(shì)，6

3、周后髖臼發(fā)育基本停止，髖臼大小開(kāi)始變小，股骨頭發(fā)育停止，頭臼不對(duì)稱進(jìn)一步加重(PO01)。3SafraninO／Fastgreen染色可見(jiàn)到實(shí)驗(yàn)組關(guān)節(jié)軟骨退變征象：Safranin0染色淺層部分染色降低，表明帶負(fù)電荷蛋白多糖明顯降低、4周后關(guān)節(jié)軟骨淺層裂隙形成、淺層中層軟骨細(xì)胞簇聚及數(shù)量減少、關(guān)節(jié)軟骨退變隨鼠齡增長(zhǎng)而加重。二、x型膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶～13(刪P一13)、ADAMTS一4、ADAMTS一5、B—catenin在不同時(shí)期D

4、DH髖關(guān)節(jié)軟骨中的表達(dá)1實(shí)驗(yàn)組x型膠原、MMP13在軟骨層軟骨細(xì)胞中不均勻表達(dá)，成簇細(xì)胞表達(dá)明顯，胞漿內(nèi)明顯棕色深染細(xì)胞數(shù)目百分比較對(duì)照組多。4周及以后與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO01)，且隨鼠齡增長(zhǎng)而表達(dá)增高。2實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組X型膠原和MMP13mRNA在4周及以后表達(dá)較對(duì)照組增加，且隨鼠齡增長(zhǎng)表達(dá)增加：ADAMTS5在8周時(shí)表達(dá)增高，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO01)。ADAMTS一4與實(shí)驗(yàn)組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)差異。3B—catenin：免疫組織化學(xué)中可見(jiàn)B—catenin在對(duì)照組大鼠2周時(shí)表達(dá)較多，隨鼠齡增長(zhǎng)表達(dá)逐漸下降，8周時(shí)免疫組化基本無(wú)表達(dá)；實(shí)驗(yàn)組Bcatenin表達(dá)無(wú)下降趨勢(shì)，持續(xù)高表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量PCRmRNA表達(dá)呈相似結(jié)果。三、體外軟骨細(xì)胞培養(yǎng)，檢測(cè)B—catenin對(duì)軟骨細(xì)胞退行性改變的影響1軟骨細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定：軟骨細(xì)胞培養(yǎng)后II型膠原免疫熒光及甲苯胺藍(lán)染色鑒定為軟骨細(xì)胞。2LiCl激活p—catenin表達(dá)：LiCl處理