內生放線菌KLBMP2170抗楊樹褐斑病活性及機理研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文通過對紅豆杉的內生放線菌進行分離,從其根、莖、葉中共分離出212株放線菌,通過對其進行培養(yǎng)特征、形態(tài)特征的觀察、16S rRNA基因測序以及序列分析,表明鏈霉菌屬為優(yōu)勢類群,其中111株為鏈霉菌,它們被分為8個分類群,分別為白孢類群(Albosporus)、黃色類群(Flavus)、玫瑰孢類群(Roseosporus)、格勞科斯(Glaucus)、燼灰類群(Cinereus)、灰紅紫類群(Griseorubroviolaceus)、

2、灰褐類群(Griseofuscus)、金色類群(Aureus)。
  對分離得到的111株鏈霉菌進行抑制楊樹褐斑病病原真菌活性篩選,結果顯示:KLBMP2009,KLBMP2051,KLBMP2061,KLBMP2078,KLBMP2088,KLBMP2170,KLBMP2174,KLBMP2176等都對楊樹褐斑病病原真菌具有抑制活性,但KLBMP2170的活性最強。然后就針對KLBMP2170進行研究,首先通過對紅豆杉內生放線菌

3、KLBMP2170進行同源性測定,測定結果為:KLBMP2170保守序列為1488bp,并運用EzTaxon數據庫進行相似性比對,比對結果表明:KLBMP2170為鏈霉菌屬成員,與Streptomyces armeniacus相似性達到97.84%,與Streptomyces artemisiae相似性達到97.38%,除此之外,KLBMP2170在系統(tǒng)發(fā)育樹上獨立成一分支,因此KLBMP2170可能為潛在的鏈霉菌屬新種。
  以

4、楊樹褐斑病病原真菌Marssonina brunneaCFCC89647為供試病原菌,以KLBMP2170發(fā)酵液對CFCC89647的抑菌率為指標,進行KLBMP2170培養(yǎng)基優(yōu)化和發(fā)酵條件優(yōu)化,優(yōu)化結果為:淀粉含量為10g/L,酵母浸膏含量為10g/L,葡萄糖含量為11g/L,(NH4)2SO4含量為4.0g/L,pH=7.0,培養(yǎng)時間為7d,溫度為28℃,轉數為160r/min。
  對KLBMP2170菌株發(fā)酵液的穩(wěn)定性及作

5、用機理研究,研究結果證明KLBMP2170發(fā)酵液對光照、紫外線的穩(wěn)定性較好,但在PH<5,溫度大于120時℃時穩(wěn)定性有所下降。另外KLBMP2170發(fā)酵液中的活性代謝產物能裂解楊樹褐斑病病原真菌的細胞壁,導致菌體空間結構塌陷,并且對細胞膜系統(tǒng)的完整性造成影響,導致菌體胞內內含物外漏,使得胞內蛋白含量減少,導致細胞死亡。
  根據楊樹葉片石蠟切片的對比照片,健康楊樹感染褐斑病病原菌后,菌絲侵入楊樹葉片的柵欄組織和海綿組織,主要是侵入

6、葉片柵欄組織,使其細胞排列由緊密有序變得疏松雜亂,并出現明顯胞間隙。另外通過楊樹葉片離體、活體實驗,結果表明無論在離體還是活體條件下KLBMP2170發(fā)酵液對楊樹病原菌均有抑制作用。
  對KLBMP2170發(fā)酵液乙酸乙酯相活性組分進行GC-MS分析,共鑒定19個化合物,其中苯乙酸(phenylacetic acid)、丁香酚(eugenol)、丁位十二內酯(Dodecalactone)為已報道的具有抑制真菌活性的化合物,并對其進

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