1、新輔助化療,又稱術(shù)前化療、誘導(dǎo)化療、初始化療等,是指對非轉(zhuǎn)移性的腫瘤,在應(yīng)用局部治療前進(jìn)行的全身性、系統(tǒng)性的細(xì)胞毒性藥物治療,是近年乳腺癌治療中的重要內(nèi)容,已成為中晚期乳腺癌治療的標(biāo)準(zhǔn)方案之一,而且已經(jīng)擴展應(yīng)用于有保乳意愿的早期可手術(shù)乳腺癌患者。雖然乳腺癌新輔助化療在全世界范圍內(nèi)得到了廣泛的關(guān)注,并進(jìn)行了大量的基礎(chǔ)研究和臨床試驗,但是乳腺癌新輔助化療領(lǐng)域還存在許多分歧和爭議,主要是完全緩解率低；無術(shù)前療效評價的確切方法；缺少療效預(yù)測和監(jiān)

2、測手段、不能個體化選擇新輔助化療；新輔助化療后影響淋巴結(jié)分期等等。由于化療具有個體差異性,即對于不同的乳腺癌患者新輔助化療的效果差異很大,但是根據(jù)目前的檢測手段,尚不能在新輔助化療實施前或是化療早期就明確患者對化療方案的敏感性,只能在臨床應(yīng)用2—3療程化療后再行評價,若無效再考慮換行其他方案,這在一定程度上會影響到對部分患者病情的控制。同時新輔助化療可以使一些患者的腋窩淋巴結(jié)消失或者降期,因此,準(zhǔn)確的乳腺癌術(shù)前／新輔助化療前淋巴結(jié)分期受

3、到人們越來越多的重視。
　　 表面加強激光解吸電離-飛行時間質(zhì)譜技術(shù)是近年發(fā)展起來的一種新的蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法,具有操作簡單、樣品用量少、靈敏度高、高通量等優(yōu)點,可以一次性獲得某一樣品中大量的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù),并且能夠直接對臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測,實現(xiàn)了質(zhì)譜技術(shù)用于臨床檢測的飛躍。國內(nèi)外不少研究者已成功將這項技術(shù)用于多種惡性腫瘤的診斷,但用于檢測化療敏感性預(yù)測因子、監(jiān)測標(biāo)志物及術(shù)前／新輔助化療前淋巴結(jié)分期的相關(guān)性研究仍然比較少見。
　

4、　 本課題旨在利用SELDI-TOF-MS,通過對乳腺癌患者新輔助化療前血清進(jìn)行蛋白質(zhì)指紋圖譜的檢測,結(jié)合生物信息學(xué)的方法,找到有價值的蛋白質(zhì)指紋圖譜化療敏感性預(yù)測模型,提高乳腺癌新輔助化療的有效率,實現(xiàn)對乳腺癌患者的個體化治療,避免化療藥物的毒副作用及無效用藥；進(jìn)一步利用血清蛋白質(zhì)指紋圖譜對化療過程進(jìn)行監(jiān)測,動態(tài)觀測療效相關(guān)因子的變化,篩選出可用于監(jiān)測療效的蛋白質(zhì)標(biāo)志物；并且運用SELDI-TOF-MS技術(shù)來分析鑒定乳腺癌患者不同淋

5、巴結(jié)分期蛋白質(zhì)表達(dá)譜的全貌,進(jìn)行術(shù)前／新輔助化療前分期,用于指導(dǎo)治療,判斷預(yù)后。
　　 第一部分血清蛋白質(zhì)指紋圖譜在乳腺癌新輔助化療療效預(yù)測方面的研究。
　　 為尋找新輔助化療療效相關(guān)的預(yù)測因子,我們進(jìn)行了本部分研究。采用SELDI-TOF—MS技術(shù)及其配套的CM10蛋白質(zhì)芯片我們檢測了參與新輔助化療的乳腺癌患者(按RECIST標(biāo)準(zhǔn)化療有效組19例,化療無效組15例)的血清蛋白質(zhì)指紋圖譜,篩選出6個差異蛋白質(zhì)峰(質(zhì)荷比為

6、5869、3291、5894、9296、5953及2220)并建立了預(yù)測模型,其中5869m／z、3291m／z、5894m／z、9296m／z和5953m／z這5個蛋白質(zhì)峰在新輔助化療有效的乳腺癌患者血清中表達(dá)較高,而2220m／z則在新輔助化療無效的患者血清中表達(dá)較高。經(jīng)過交叉驗證,該預(yù)測模型的靈敏度為89.5％(17／19),特異性為73.3％(11／15),總準(zhǔn)確率為82.4％(28／34)。
　　 按化療前后腫塊大小實

7、際變化(腫塊縮小組有25例,腫塊增大組有9例)建立模型,共篩選出了5個有價值的差異蛋白質(zhì)峰(質(zhì)荷比為3323、5869、5894、7775及6470),其中3323m／z、5869m／／z、5894m／z和7775m／z這4個蛋白質(zhì)峰在腫塊縮小組的乳腺癌患者血清中表達(dá)較高,而6470m／z則在腫塊增大組的患者血清中表達(dá)較高。經(jīng)過交叉驗證,該預(yù)測模型的靈敏度為96.0％(24／25),特異性為77.8％(7,9),總準(zhǔn)確率為91.2％(3

8、1,34)。
　　 5869m／z和5894m／z這兩個蛋白質(zhì)峰同時進(jìn)入了兩個療效預(yù)測模型,可能是比較合適的新輔助化療療效預(yù)測標(biāo)志物,下一步我們將對這兩個蛋白質(zhì)進(jìn)行分離、純化和分析解碼,以進(jìn)一步明確與新輔助化療敏感或耐藥的關(guān)系。
　　 第二部分血清蛋白質(zhì)指紋圖譜在乳腺癌新輔助化療過程中的動態(tài)監(jiān)測。
　　 為了確定乳腺癌患者在新輔助化療前后血清蛋白質(zhì)水平上的變化,我們對34例乳腺癌患者新輔助化療前后的血清進(jìn)行了蛋白

9、質(zhì)指紋圖譜檢測,找出前后表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義的蛋白質(zhì)峰,并將蛋白質(zhì)峰的變化情況在不同療效組間進(jìn)行對比,篩選出11個蛋白質(zhì)峰在新輔助化療后,兩組間的變化趨勢不同,因此可能與化療療效相關(guān)。然后我們進(jìn)一步考察這11個蛋白質(zhì)峰在25例參與動態(tài)監(jiān)測的乳腺癌患者中每一例患者每次化療后的變化情況,形成目標(biāo)蛋白質(zhì)在每例患者隨化療療程表達(dá)情況的動態(tài)變化趨勢圖,以后面3次蛋白質(zhì)峰的平均值與第一次(化療前)的峰值進(jìn)行比較,來判斷變化趨勢是上升還是下降,以減小

10、單次測量所造成的誤差。比較每個蛋白質(zhì)峰的變化趨勢在療效組內(nèi)和組間的分布情況,找到組內(nèi)變化情況較一致而組間變化趨勢不同的蛋白質(zhì)峰。最后發(fā)現(xiàn)4302m／z和4645 m／z在有效組中的10／13例(76.9％)患者隨化療進(jìn)行表達(dá)下降,而在無效組中的8／12例(66.7％)患者隨化療進(jìn)行表達(dá)上升；3291m／z在有效組中的8／13例(61.5％)患者隨化療進(jìn)行表達(dá)下降,而在無效組中的8／12例(66.7％)患者隨化療進(jìn)行表達(dá)上升；5894m／

11、z在有效組中的8／13例(61.5％)患者隨化療進(jìn)行表達(dá)下降,而在無效組中的9／12例(75％)患者隨化療進(jìn)行表達(dá)上升(見表4.3)。我們認(rèn)為這4個蛋白質(zhì)峰在新輔助化療過程中有監(jiān)測意義,并且能區(qū)分治療效果。
　　 進(jìn)一步搜索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫,我們發(fā)現(xiàn)4302 m／z的蛋白質(zhì)峰可能是腎上腺髓質(zhì)素-2(adrenomedullin-2,ADM-2),這個蛋白質(zhì)有促進(jìn)細(xì)胞生長、增殖和存活及促進(jìn)血管、淋巴管新生的作用；4645m／z的蛋白質(zhì)

12、峰可能是MSSP(myc single strandbinding protein),作為c—Myc基因的調(diào)節(jié)子,參與DNA的復(fù)制和細(xì)胞周期從G1期到S期的轉(zhuǎn)化；3291m／z的蛋白質(zhì)峰可能是胰高血糖素(glucagon),有研究發(fā)現(xiàn)GLP-2通過對腸上皮完整性的支持,使化療的有效性不致遭到損壞,從而使腫瘤患者獲得治療方面的優(yōu)勢；5894m／z這個蛋白質(zhì)峰可能是活性氧物質(zhì)調(diào)節(jié)子1(reactive oxygen species modu

13、lator1),它通過調(diào)節(jié)內(nèi)源性活性氧物質(zhì)(ROS)影響多種信號通路使細(xì)胞生長失控,ROMO1表達(dá)的增加在腫瘤發(fā)生、增殖過程中起著重要作用,而且Hwang等人發(fā)現(xiàn)ROMO1的表達(dá)可能與5-FU(氟尿嘧啶)的耐藥有關(guān)。下一步我們將對這4個蛋白質(zhì)進(jìn)行分離、純化和分析解碼,并進(jìn)一步研究其與化療療效的關(guān)系。
　　 第三部分血清蛋白質(zhì)指紋圖譜在乳腺癌患者腋窩淋巴結(jié)分期方面的研究。
　　 為了找到準(zhǔn)確、微創(chuàng)的新輔助化療前腋窩淋巴結(jié)分

14、期方法,避免化療后失去區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況這一乳腺癌最重要的預(yù)后信息,我們進(jìn)行了此部分研究。比較18例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者和16例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者的血清蛋白質(zhì)質(zhì)譜數(shù)據(jù),篩選出5個蛋白質(zhì)峰的組合(3164m／z、3979m／z、9196m／z、2734m／z和3963m／z)建立淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測模型。其中3164m／z、3979m／z和3963m／z這3個蛋白質(zhì)峰在淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者血清中表達(dá)較高,而9196m／z和2734m

15、／z這2個蛋白質(zhì)峰則在淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者血清中表達(dá)較高。交叉驗證結(jié)果顯示該模型的靈敏度為88.9％(16／18),特異度為87.5％(14／16),總準(zhǔn)確率為88.2％(30／34)。
　　 進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn),3979 m／z蛋白質(zhì)峰的表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目相關(guān)(R2=0.898)。通過搜索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫我們了解到3979 m／z蛋白質(zhì)峰可能是一種叫P物質(zhì)的蛋白質(zhì),有研究顯示P物質(zhì)參與乳腺癌細(xì)胞的增殖、抵抗放射線損傷、防止凋

16、亡、誘導(dǎo)生長因子和促血管生成因子以及促進(jìn)乳腺癌骨轉(zhuǎn)移等多種病理進(jìn)程,因此,P物質(zhì)與乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系值得我們進(jìn)一步深入研究。
　　 結(jié)論：
　　 1、由5869m／z、3291m／z、5894m／z、9296m／z、5953m／z和2220m／z六個蛋白質(zhì)峰組合所構(gòu)建的模型能達(dá)到預(yù)測乳腺癌患者新輔助化療后臨床緩解情況的最佳預(yù)測效果,總準(zhǔn)確率82.4％。
　　 2、由3323m／z、5869m／z、5894

17、m／z、7775m／z和6470m／z五個蛋白質(zhì)峰組合所構(gòu)建的模型能達(dá)到預(yù)測乳腺癌患者新輔助化療后乳腺腫塊大小變化的最佳預(yù)測效果,總準(zhǔn)確率91.2％。
　　 3、5869m／z和5894m／z這兩個蛋白質(zhì)峰同時進(jìn)入了兩個療效預(yù)測模型,可能是比較合適的新輔助化療療效預(yù)測標(biāo)志物,值得進(jìn)一步研究。
　　 4、4302m／z、4645m／z、3291m／z和5894m／z這4個蛋白質(zhì)峰在新輔助化療有效組和無效組間變化趨勢相反,可

18、作為用于新輔助化療療效監(jiān)測的標(biāo)志物。
　　 5、4302m／z的蛋白質(zhì)峰可能是腎上腺髓質(zhì)素-2(adrenomedullin-2,ADM-2)；4645 m／z的蛋白質(zhì)峰可能是MSSP(myc single strand binding protein)；3291m／z的蛋白質(zhì)峰可能是胰高血糖素(glucagon)；5894m／z這個蛋白質(zhì)峰可能是活性氧物質(zhì)調(diào)節(jié)子1(Reactive oxygen species modulat

19、or1,ROM01)。下一步我們將對這4個蛋白質(zhì)進(jìn)行分離、純化和分析解碼,并進(jìn)一步研究其與化療療效的關(guān)系。
　　 6、5894m／z這個蛋白質(zhì)峰既可以可以在新輔助化療前預(yù)測療效,又可以在化療進(jìn)行中監(jiān)測療效,值得我們在接下來的研究中加以重點關(guān)注。
　　 7、由3164m／z、3979m／z、9196m／z、2734m/z和3963m／z五個蛋白質(zhì)峰組合所構(gòu)建的模型能達(dá)到預(yù)測乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的最佳預(yù)測效果,總準(zhǔn)確率達(dá)88