1、目的:通過給小鼠腹腔注射不同濃度乙醇,建立一個早期的大量飲酒的動物模型,運用電鏡和光鏡技術觀察心肌細胞的形態(tài)學及超微結構的變化,用酶細胞化學染色方法觀察心肌細胞細胞色素C氧化酶的活性變化,采用免疫組織化學方法觀察酒精對細胞凋亡及凋亡相關基因BCL-2和BAX表達的影響,研究酒精對心臟毒性作用的機理.方法:將60只健康雄性昆明種小白鼠隨機分為4組:酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組和對照組,分別給予10％、20%、30%濃度酒精和生理鹽水腹腔注射,每日一次

2、,連續(xù)處理30天后取材.部分標本制成石蠟切片,經HE染色,光鏡下觀察酒精對心肌細胞形態(tài)學影響;經核固紅-結晶紫染色對心肌細胞凋亡情況進行定量分析;用免疫組織化學的方法顯示酒精對心肌細胞凋亡相關基因BCL-2和BAX的表達情況,并利用圖像分析技術進行定量分析.部分標本制備透射電鏡標本,電鏡下觀察酒精對心肌細胞超微結構的影響.其余標本置于恒冷箱切片機內,分別切15μm及40μm厚冰凍切片,細胞色素C氧化酶染色,光鏡下觀察酶活性變化,并利用圖

3、像分析技術進行定量分析;40μm厚冰凍切片,孵育后制作電鏡標本,透射電鏡下觀察心肌細胞線粒體上細胞色素C氧化酶的活性變化.結論:1、心肌組織結構的改變與酒精的攝入量成正相關,攝入量較少時,光鏡和電鏡觀察均未出現明顯的心肌細胞的異常變化,但隨著攝入量的增大,心肌細胞的超微結構即發(fā)生異常改變,且隨著濃度的增加,異常更加顯著.當飲酒繼續(xù),結構上的損傷會進一步加劇.結構的改變與心肌功能異常密切相關,當各種結構損傷達到一定程度時必然會出現心肌功能

4、的改變.2、心肌細胞凋亡在酒精對心肌影響的發(fā)生機制上發(fā)揮一定的作用,隨著酒精濃度的增加,心肌細胞的凋亡征象愈加明顯,固縮核細胞數逐漸增加,我們推測酒精可能引起心肌細胞凋亡.3、長期大量飲酒能減弱線粒體的功能,改變其結構;而當心肌細胞發(fā)生凋亡時,線粒體結構和功能也可發(fā)生改變,可以推斷出線粒體也參與了酒精引起心肌細胞凋亡的過程.4、酒精引起的心肌細胞凋亡與凋亡相關基因Bcl-2和Bax的異常表達有關,二者在細胞凋亡中是相互拮抗的關系,酒精使