1、溫州醫(yī)學院碩士學位論文7型腺病毒E1基因和5型腺病毒E1A基因的克隆及表達姓名：沈鑫烽申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：呂建新;彭穎20080501溢螺醫(yī)學陵魏圭學位淪文結果：l 、A d 的分離培養(yǎng)和基因組D N A 提取、酶切鑒定 病毒基因組D N A 的B a m H l 、脅療d l l l 和S i n a i 酶切圖譜，對照國外文獻，從B a m H I 的帶型初步確定本次分離的A d 毒株為A d 7 d 2

2、 型。2 、p l R E S - N e o ．A d 7 E 1 A 重組質粒的構建，A d 7E I A 基因的表達、免疫印跡分析雙酶切及測序結果表明p I R E S ，N e o ．A d 7 E I A 表達載體謄句建成功。R T - P C R 和免疫印跡結果最示A d 7 E 1 A 基因已被成功轉染入A 5 4 9 細胞并產(chǎn)生表達。3 、p l R E S - A d 7 E I A ．E 1 B 重組質粒的構建，A

3、d 7 E 1 A 、E 1 B 基因的表達 雙酶切及測序結果表明p l R E S —A d 7 E t A —E 1 B 表達載體構建成功。R T - P C R 結果顯示A d 7 E 1 A 。E1 B 基因已被成功轉染入A 5 4 9 細胞并產(chǎn)生表達。4 、p l R E S ．N e o ．A d 5 E 1 A 重組質粒的構建，A d 5 E I A 基因的表達、免疫鞠跡分析雙酶切及測序結果表明p l R E S ．N e

4、 o - A d 5 E I A 表達載體構建成功。R T —P C R 和免疫印跡結果顯示A d 5 E 1 A 基因已被成功轉染入A 5 4 9 細胞并產(chǎn)生表達。結論：本實驗成功分離和鑒定了A d 7 d 2 瘸毒株，并成功構建了A d 7E I A 、A d 7 E I A - E I B 和A d 5E I A 的真核表達體系，為進～步探討A d 7 E I 基因的腫瘤基函治療效應及應用前景提供方法，并為A d 7 溶癌腺病毒的