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文檔簡介
1、目的:研究缺氧缺血性新生大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)因子氧調(diào)節(jié)蛋白150(oxygen regulate protein150,ORP150)、X-盒結(jié)合蛋白1(X-box binding protein1,XBP-1)和CHOP(C/EBP homologous protein,CHOP)的表達變化,以探討它們在缺氧缺血性腦損傷中的作用,并初步探討參附注射液(SFI)干預治療后對其影響及可能機制。
方法:將新生7H齡S
2、prague-Dawley(SD)大鼠隨機分為三組:假手術(shù)組(S)、生理鹽水對照組(C)、參附治療組(SF)。每一組按照觀測的時間點不同分為3h、6h、12h、24h、3d、7d六個亞組,每個亞組8只。用Rice法制備新生大鼠H1BD模型。在每個時間點將大鼠斷頭取右側(cè)皮質(zhì)腦組織,采用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(RT-PCR)法檢測大鼠皮層腦組織中ORP150、XBP-1及CHOP的mRNA表達變化;采用Western-Blot法測定ORP15
3、0及CHOP的蛋白表達變化;用TUNEL染色法檢測相應時間點光鏡下腦皮質(zhì)組織的凋亡細胞。
結(jié)果:
1.RT-PCR條帶顯示假手術(shù)組ORP150、XBP-1及CHOP的mRNA表達很弱;生理鹽水對照組與參附治療組ORP150、XBP-1及CHOP的mRNA在缺氧缺血(HI)后3h即表達增加,與假手術(shù)組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);ORP150mRNA在HI后6h仍有較高表達,12h及24h即明顯下降,
4、7d時接近假手術(shù)組。參附治療組ORP150mRNA在HI后各時間點的表達水平均接近生理鹽水對照組(P>0.05);XBP-1mRNA及CHOPmRNA的表達量分別在HI后6h、12h時達到峰值,之后均有所回落,7d時接近假手術(shù)組水平;其中參附治療組XBP-1mRNA及CHOPmRNA表達量12h、24h、3d時均較生理鹽水對照組明顯下降,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
2.Westem-bolt蛋白印跡顯示假手術(shù)組O
5、RP150及CHOP的蛋白均有少量表達;生理鹽水對照組與參附治療組ORP150及CHOP蛋白在HI后3h即表達增加,與假手術(shù)組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);HI后12-24h ORP150蛋白表達明顯下降,7d時接近假手術(shù)組。參附治療組ORP150在HI后各時間點的蛋白表達水平均接近生理鹽水對照組(P>0.05);HI后CHOP蛋白表達在24h達到高峰,3d后下降,7d時接近假手術(shù)組。參附治療組CHOP蛋白表達量12h、24h
6、、3d時較生理鹽水對照組明顯下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
3.HI后3h生理鹽水對照組與參附治療組即發(fā)現(xiàn)結(jié)扎側(cè)腦皮質(zhì)有少量的凋亡細胞,隨著缺氧缺血時間的延長,凋亡細胞逐漸增多,24h達到高峰后下降;SF組在HI后24h、3d、7d均明顯低于C組(P<0.05)。
結(jié)論:
1.新生大鼠腦缺氧缺血后誘發(fā)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應,ORP150、XBP-1及CHOP參與了新生大鼠HIBD后遲發(fā)性神經(jīng)
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