1、分類號(hào)V D C博士學(xué)位論文．王73 ．＆§O8密級(jí)W I F ．1 基因啟動(dòng)子甲基化對(duì)星形膠質(zhì)瘤生物學(xué)行為的影響R e d u c e d e x p r e s s i o na n d a b e r r a n t p r o m o t e r m e t h y l a t i o no f W n t i n h i b i t o r y f a c t o r - ／／na s t r o c y t o m

2、 a s作者姓 學(xué)科專學(xué)院( 系、指導(dǎo)教名： 楊轉(zhuǎn)移業(yè)： 神經(jīng)外科所) ： 湘雅醫(yī)院師： 方加勝教授論文答辯日期型：! ：! 答辯委員中 南 大 學(xué)二0 —0 年五月博士學(xué)位論文 中文摘要摘 要背景和目的W n t ／1 3 ．c a t e n i n 信號(hào)通路參與了包括星形膠質(zhì)瘤在內(nèi)的多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。W I F 一1 是W n t ／1 3 ．c a t e n i n 信號(hào)通路的拮抗因子，有研究發(fā)現(xiàn)由于其啟動(dòng)子的甲基化導(dǎo)致

3、W I F ．1 表達(dá)減少甚至缺失，W n t 信號(hào)通路異常活化，從而引起腫瘤的發(fā)生發(fā)展。但是，上述變化機(jī)制在星形膠質(zhì)瘤中尚未見報(bào)道。因此，本研究擬分析星形膠質(zhì)瘤中W I F ．1 的表達(dá)情況和啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)，以及W I F ．1 啟動(dòng)子甲基化對(duì)星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為影響，從而確定啟動(dòng)子甲基化是否是星形膠質(zhì)瘤中W I F 一1 表達(dá)沉默的主要機(jī)制，并證明W I F 一1在星形膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。研究方法首先，用免疫組化、

4、半定量的R T —P C R 和甲基化特異·I 生I ' C R 檢測(cè)了3 5 例星形膠質(zhì)瘤和4 它7 I J 正常腦組織中W I F ．1 的表達(dá)情況和啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)，分析了W I F ．1 的表達(dá)和啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的關(guān)系；然后，用去甲基化藥物5 ．氮一2 ’．脫氧胞苷處理膠質(zhì)母細(xì)胞瘤來(lái)源的U 2 5 1 細(xì)胞系和3 例原代腫瘤細(xì)胞，分析藥物作用前后W I F ．1 的表達(dá)和啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)；最后，我們將W I F

5、 ．1 的表達(dá)載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染U 2 5 1細(xì)胞系，通過(guò)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)( F C M ) 分析W I F ．1 基因?qū) 2 5 1 細(xì)胞系生物學(xué)行為的影響。結(jié)果與正常腦組織相比，星形膠質(zhì)瘤中W I F ．1m R N A 和蛋白的表達(dá)明顯降低。3 5 例星形膠質(zhì)瘤中，2 0 例( 5 7 ．1 4 ％) 發(fā)現(xiàn)W I F ．1基因啟動(dòng)子甲基化。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)W I F ．1 基因啟動(dòng)子甲基化與其表達(dá)下降明顯相關(guān)。U 2