1、近年研究發(fā)現(xiàn),位于染色體3p21.3位點(diǎn)的RASSF1(FAS association domain family 1 RASSF1)基因,有多種不同mRNA剪接體,其中RASSFlA是其中主要的一種<'[9]>.RASSFlA基因編碼RA結(jié)構(gòu)域(Ras-Rap association domain),編碼的蛋白對腫瘤有明顯抑制作用.現(xiàn)認(rèn)為,RASSFlA基因是一種抑癌基因.在腫瘤中觀察到該基因啟動子區(qū)異常甲基化,同時(shí)腫瘤細(xì)胞中其表達(dá)經(jīng)

2、常缺失<'[10]>.目前,對RASSFlA在膠質(zhì)瘤中的研究還少報(bào)道.在膠質(zhì)瘤中,RASSFlA的表達(dá)情況如何?其啟動子區(qū)甲基化情況如何?如何存在RASSFlA表達(dá)缺失,啟動子區(qū)甲基化是否是其發(fā)生的主要機(jī)制呢?因此,該課題開展對RASSFlA基因在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其啟動子區(qū)甲基化的研究.為研究RASSFlA在膠質(zhì)瘤中的表達(dá),該實(shí)驗(yàn)采用SYBR Green I熒光染料,建立檢測RASSFlA mRNA的實(shí)時(shí)定量PCR的方法<'[11]>.

3、構(gòu)建克隆載體作為定量模板Roche LightCycler<'R>定量檢測不同惡性程度腦膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織標(biāo)本.48例不同惡性程度腦膠質(zhì)瘤組織中有5例檢測不出,與內(nèi)參照三磷酸甘油醛脫氫酶基因GAPDH(glyceraldehycle-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)比較后,其余RASSFlA mRNA的表達(dá)范圍從0.08~1.00/μg,均值為0.50±0.004/μg.6例正常腦組織標(biāo)本均有RASS

4、FlA mRNA的表達(dá),范圍從0.70~1.80/μg,均值為1.05±0.08/μg.各期膠質(zhì)瘤中RASSFlA的mRNA的表達(dá)水平均低于正常腦組織組,但膠質(zhì)瘤不同病理級別組之間的差異無顯著意義.U25l細(xì)胞株表達(dá)RASSFlA基因.已有文獻(xiàn)報(bào)道RASSFlA基因表達(dá)缺失伴隨著基因啟動子甲基化<'[12]>.在成神經(jīng)管細(xì)胞瘤細(xì)胞株中,RASSFlA基因啟動子發(fā)生異常甲基化導(dǎo)致基因表達(dá)缺失<'[13]>.為了比較RASSFlA基因啟動子

5、甲基化在膠質(zhì)瘤中發(fā)生的頻率,我們同時(shí)對DAPK和P16基因進(jìn)行了檢測.用甲基化特異性PCR方法檢測后,RASSFlA、DAPK、P16基因的甲基化頻率分別為13/41(31.7﹪),6/41(14.6﹪)和3/41(7.3﹪).RASSFlA、DAPK和P16基因的甲基化程度和患者臨床資料的差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.28例配對組織標(biāo)本中,11例RASSFlA基因啟動子區(qū)甲基化的膠質(zhì)瘤中有5例其mRNA表達(dá)缺失(P=0.005).U251細(xì)胞