1、小麥白粉病是由白粉病菌(Erysiphe graminis Dc.f.sp tritic Marchal)引起的世界性真菌病害,培育抗性品種是控制白粉病的有效途徑。南京農(nóng)業(yè)大學細胞遺傳研究所培育的普通小麥-簇毛麥6VS/6AL易位系帶有的抗白粉病基因Pm21抗性強、抗譜廣,因此對Pm21基因及抗白粉病相關基因進行克隆研究具有重要的意義。 本實驗室利用基因芯片技術,克隆到定位在簇毛麥6V染色體短臂上的抗白粉病相關基因Hv-S/TP

2、K,并根據(jù)Hv-S/TPK的序列開發(fā)了一個與抗白粉病基因Pm21共顯性的分析標記CINAU15。本研究利用克隆池PCP法用CINAU15篩選小麥-簇毛麥6VS/6AL易位系的基因組TAC文庫。該文庫由22塊96孔板組成,每孔中舍有約1000個混合的TAC克隆.為了用PCR篩選文庫,首先提取了352份混合質粒,然后用CINAU15篩選,獲得了陽性TAC單克隆,并進一步獲得了含有Hv-S/TPK序列的5160bp的亞克隆。Hv-S/TPK基

3、因在5'非翻譯區(qū)有一個內(nèi)含子,在起始密碼子和終止密碼子之間有3個內(nèi)含子和4個外顯子,4個外顯子序列與簇毛麥上已得到的Hv-S/TPK的cDNA序列100％同源。 Hv-S/TPK基因起始密碼子的上游存在TATA盒,TATA盒的上游存在兩個W-box、兩個PAL-box及三個OCS元件。同時在啟動子區(qū)還發(fā)現(xiàn)很多與逆境、激素和組織特異性等相關的順式作用元件。利用基因槍將包裹的表達載體pHv-S/TPK-GFP轟擊6VS/6AL易位系