1、中風是導致人類死亡的三大疾病之一，是因病致殘的首要原因，也是世界范圍內一個主要的公共健康負擔。對中風病理生理和防治藥物的長期研究表明，這類危險因素眾多、病理生理變化繁復的復雜性疾病，單純針對某一個單一的分子靶點，甚或某一單一類型的細胞，都難以收到良好的治療效果(如神經(jīng)保護劑的研發(fā)現(xiàn)狀)。故而近年來提出了聯(lián)合治療和雞尾酒療法的設想，并已有部分方案進入臨床。中國傳統(tǒng)醫(yī)學一貫主張和強調綜合調理，強調調動人體自身的代償與防衛(wèi)體系來抵御各種致病因

2、素的不良影響?；钛鏊幭ㄍńj方以血管和經(jīng)絡為起點而通達全身，調動軀體網(wǎng)絡的多種細胞與分子成分，促進腦血管病變后的結構和功能重塑，從而發(fā)揮其防治腦血管疾病的效應。然而我們對其作用的物質基礎和作用機理等尚缺乏較為系統(tǒng)深入的了解。本研究結合多年來中藥現(xiàn)代研究經(jīng)驗和中醫(yī)藥的系統(tǒng)整體觀念，在實驗室前期研究的基礎上，探討了消栓通絡方有效成分組對缺血性腦血管疾病的防治效應與作用機理。 ⑴消栓通絡方有效成分組的篩選與確定。根據(jù)腦缺血損傷的病

3、理生理基礎，選用內皮細胞低氧損傷模型、血管環(huán)舒張實驗、神經(jīng)細胞低氧損傷模型、腦線粒體脂質過氧化模型以及DPPH氧自由基清除模型，對多種萃取方法以及大孔樹脂方法從消栓通絡方中制備的16個組分進行了兩輪篩選。在前期138個連續(xù)組分篩選的基礎上，結合上述各模型篩選和各組分成分分析結果，以及規(guī)模生產(chǎn)的需要，確定了消栓通絡方的有效成分組及制備工藝。 ⑵消栓通絡方有效成分組對缺血性腦血管疾病的防治效應。①消栓通絡方有效成分組對右旋糖酐所致血

4、瘀和腦微循環(huán)障礙的影響。小鼠經(jīng)尾靜脈注射右旋糖酐和伊文思蘭后出現(xiàn)明顯的血瘀征象，同時有微循環(huán)障礙，腦血流量下降31.6±10.8％，而預先灌胃給予消栓通絡方有效成分組可以緩解血瘀征象，改善腦部微循環(huán)障礙。②消栓通絡方有效成分組對大鼠急性腦缺血損傷的保護作用。大鼠大腦中動脈栓塞24小時后，動物出現(xiàn)明顯的神經(jīng)行為功能障礙，大腦中動脈供血區(qū)域出現(xiàn)較大范圍的梗死(28.8±3.5％)。消栓通絡方有效成分組(XECG)能縮小腦梗死范圍，改善神經(jīng)行

5、為障礙。實驗發(fā)現(xiàn)，XECG能抑制缺血后異常激活的iNOS，降低腦內異常升高的NO水平。同時缺血后腦內白細胞浸潤增加，MPO活性升高，而XECG能有效抑制MPO活性的異常升高。實驗還發(fā)現(xiàn)，XECG能抑制缺血后腦內促凋亡蛋白Bax的過度表達，有助于Bcl—2家族平衡的回復。上述結果提示XECG可能通過抑制iNOS的過度激活和缺血后炎癥反應，抑制缺血后組織細胞凋亡等多種途徑改善腦缺血損傷。③消栓通絡方有效成分組對大鼠慢性腦缺血損傷的保護作用。

6、大鼠雙側頸總動脈結扎致長期慢性缺血后，腦內，尤其是海馬區(qū)神經(jīng)元損傷與脫失明顯，同時可見腦內星形膠質細胞增生，小膠質細胞活化，并有白質疏松和脫髓鞘現(xiàn)象。KB染色發(fā)現(xiàn)纖維排列紊亂并有空泡形成，部分甚至可見有髓鞘神經(jīng)纖維消失。Morris水迷宮檢測發(fā)現(xiàn)，XECG能改善慢性腦缺血所致的大鼠學習記憶能力缺陷。同時，組織病理學檢查和免疫組化結果顯示，XECG可改善缺血所致的海馬區(qū)神經(jīng)元損傷與脫失，改善腦白質疏松。④消栓通絡方有效成分組對缺血后腦血管

7、反應性的影響。已有的基礎與臨床研究表明腦缺血后血管反應性降低，而且血管反應性的高低也和中風患者的臨床預后有關。通過對大鼠腦缺血后胸主動脈的收縮反應以及乙酰唑胺負荷實驗中腦血流量變化的檢測結果發(fā)現(xiàn)，雙側頸總動脈結扎后大鼠血管反應性明顯降低，而XECG則能明顯改善缺血后的腦血管反應性，注射乙酰唑胺后腦血流量的增加由模型對照組的2.1±1.8％上升至高劑量組的21.4±8.4％。腦血管灌注造影結果顯示，XECG給藥組大腦后動脈等較對照組有所增

8、粗，側枝循環(huán)改善。 ⑶消栓通絡方有效成分組防治腦缺血損傷的作用機制研究。①XECG對腦缺血后血管新生的影響。腦缺血后血管新生在組織修復與功能重建中起重要作用，與中風患者的生存期呈正相關。本部分實驗采用Ki67和vWf免疫組化標記檢測缺血后血管管徑、密度以及內皮細胞增殖情況。結果顯示，XECG給藥組腦內毛細血管密度增加，管徑有所增大，內皮細胞增殖明顯。提示XECG能促進缺血后血管生成。這也可能是其改善缺血后腦血流與血管反應性的基礎

9、之一。②XECG對缺血后腦內生化與分子環(huán)境的影響。中藥復方不僅通過直接影響相關的分子靶標而發(fā)揮作用，更在于改善機體內環(huán)境，充分調動機體各種內源性的力量而發(fā)揮其防病治病效應。腦缺血后的血管新生與神經(jīng)再生等重塑過程也依賴于全身和局部分子及細胞環(huán)境的改善。通過對缺血后血液粘度、腦內NO含量、iNOS活性的測定，以及VEGF、BDNF、APJ、Tie—2和Flk的檢測，發(fā)現(xiàn)XECG能降低血液粘度，改善血液流動環(huán)境。而且能降低腦內異常激活的iNO

10、S活性和NO的異常升高，同時能促進VEGF等促血管生成因子的表達，從而為缺血后的血管生成和功能重建提供了有益的機體環(huán)境。③XECG及消栓通絡方中部分化合物對內皮細胞低氧損傷的作用與機制研究。氯化鈷能有效模擬低氧所誘導的多種分子事件，本部分實驗采用氯化鈷誘導EA．hy926內皮細胞低氧損傷模型，探討XECG內主要組分和化合物對內皮細胞低氧損傷的保護作用及機理。實驗結果表明，XECG內多種組分對內皮細胞低氧損傷有不同程度的保護作用，其中金絲