1、玉米大斑病菌是一種重要的絲狀病原真菌，目前對(duì)病菌生物學(xué)、生理分化、遺傳變異、致病性、發(fā)育調(diào)控等研究較為深入。研究表明，由異源三聚體G蛋白介導(dǎo)的cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對(duì)植物病原真菌的生長(zhǎng)發(fā)育及致病性有重要的調(diào)控作用。其中磷酸二酯酶通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞cAMP水平，既可以調(diào)控病菌的生長(zhǎng)發(fā)育，同時(shí)又對(duì)病菌的細(xì)胞形態(tài)建成具有重要調(diào)控作用。本課題組已獲得2個(gè)編碼磷酸二酯酶基因StH-PDE和StL-PDE的缺失突變體，其中StH-PDE基因缺失突變體表現(xiàn)為

2、無(wú)分生孢子產(chǎn)生、細(xì)胞壁完整性缺陷及黑色素含量下降。為進(jìn)一步證實(shí)StH-PDE基因在上述方面的作用，我們構(gòu)建了StH-PDE的回復(fù)載體，通過(guò)PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化技術(shù)獲得了StH-PDE回復(fù)突變體。該回復(fù)突變體的菌落形態(tài)、顏色，細(xì)胞壁完整性缺陷及黑色素含量均回復(fù)到WT菌株水平，但分生孢子產(chǎn)量遠(yuǎn)未回復(fù)到WT菌株水平。
　　對(duì)StH-PDE敲除突變體及野生型菌株進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析，尋找可能受到StH-PDE基因敲除影響并且與病菌絲狀生

3、長(zhǎng)、細(xì)胞壁完整性等相關(guān)的功能基因。此外，蛋白激酶A作為cAMP下游的靶蛋白，通過(guò)磷酸化下游靶標(biāo)蛋白發(fā)揮調(diào)控絲狀真菌的形態(tài)建成及致病性的作用。本研究利用酵母雙雜交技術(shù)對(duì)蛋白激酶A催化亞基與候選蛋白的互作關(guān)系進(jìn)行體內(nèi)驗(yàn)證，并通過(guò)構(gòu)建原核表達(dá)載體對(duì)StPKA-C2進(jìn)行原核表達(dá)及蛋白純化，為進(jìn)一步體外獲得下游靶標(biāo)蛋白奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:
　　1.玉米大斑病菌StH-PDE基因調(diào)控分生孢子產(chǎn)生，但對(duì)病菌生長(zhǎng)無(wú)明顯影響。
　　2.S

4、tH-PDE正調(diào)控大斑病菌黑色素生物合成。基因敲除使黑色素合成相關(guān)基因表達(dá)水平明顯下降，胞內(nèi)黑色素含量下降，菌落顏色明顯變淺。
　　3.StH-PDE正調(diào)控病菌細(xì)胞壁完整性?；蛉笔?dǎo)致8個(gè)幾丁質(zhì)合成酶基因中的7個(gè)基因表達(dá)明顯下調(diào)，細(xì)胞壁幾丁質(zhì)含量明顯降低。
　　4.對(duì)野生型(WT)、△StH-PDE菌株進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析，△StH-PDE基因缺失突變體與WT相比，轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生明顯變化，發(fā)現(xiàn)差異基因1620個(gè)，上調(diào)889個(gè)，