1、該實(shí)驗(yàn)通過(guò)常規(guī)分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞,應(yīng)用相應(yīng)細(xì)胞因子體外誘導(dǎo)分化出DC和CIK細(xì)胞,并將DC和CIK細(xì)胞共培養(yǎng),觀察DC與同源CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后培養(yǎng)物的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、體外增殖活性、細(xì)胞表型和細(xì)胞毒活性變化,對(duì)CIK和DC-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞抗瘤機(jī)制做進(jìn)一步研究,對(duì)過(guò)繼免疫療法進(jìn)行新的探索.第一部分,樹(shù)突狀細(xì)胞與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后體外增殖和殺瘤活性研究.目的:觀察樹(shù)突狀細(xì)胞與同源CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后培養(yǎng)物的細(xì)胞形態(tài)學(xué)、表型、增殖活性變化,及D

2、C對(duì)CIK細(xì)胞細(xì)胞毒活性的影響.方法:提取健康供血者的PBMC,應(yīng)用相應(yīng)的細(xì)胞因子體外誘導(dǎo)出DC與CIK細(xì)胞;用A549肺腺癌細(xì)胞裂解液抗原沖擊DC,經(jīng)抗原致敏與未經(jīng)抗原致敏的DC分別和CIK細(xì)胞共培養(yǎng),動(dòng)態(tài)觀察CIK細(xì)胞和DC-CIK培養(yǎng)物的增殖活性;在流式細(xì)胞儀上做動(dòng)態(tài)培養(yǎng)物的表型分析;定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中的IFN-γ和IL-12的分泌水平;并用MTT法檢測(cè)CIK細(xì)胞、DC-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞和抗原致敏的DC-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞殺傷A

3、549肺腺癌細(xì)胞和BEL-7404肝癌細(xì)胞的活性.第二部分,樹(shù)突狀細(xì)胞與CIK細(xì)胞治療結(jié)腸癌血源性肺轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究.目的:觀察樹(shù)突狀細(xì)胞與同源CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后治療結(jié)腸癌血源性肺轉(zhuǎn)移的可能性.方法:提取健康供血者的PBMC,應(yīng)用相應(yīng)的細(xì)胞因子體外誘導(dǎo)出DC與CIK細(xì)胞;用Lovo結(jié)腸癌細(xì)胞裂解液抗原沖擊DC,經(jīng)抗原致敏與未經(jīng)抗原致敏的DC分別和CIK細(xì)胞共培養(yǎng).將Lovo結(jié)腸癌細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射給Balb/c裸鼠建立結(jié)腸癌血源性肺轉(zhuǎn)移模型

4、,應(yīng)用CIK細(xì)胞、DC-CIK細(xì)胞和Lovo結(jié)腸癌細(xì)胞裂解液致敏的DC-CIK細(xì)胞進(jìn)行免疫治療.除對(duì)照組外,分別于接種腫瘤的第3,7,10天尾靜脈輸入各組效應(yīng)細(xì)胞,觀察裸鼠生存時(shí)間.Trizol法抽取組織或細(xì)胞中的總RNA,采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法測(cè)定Lovo結(jié)腸癌細(xì)胞、裸鼠正常組織和癌組織CEA基因的表達(dá).第三部分,化療后樹(shù)突狀細(xì)胞與CIK細(xì)胞抗腫瘤研究.目的:觀察樹(shù)突狀細(xì)胞與同源CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后培養(yǎng)物的表型、體外增