1、目的:
　　通過構(gòu)建殼聚糖-明膠三維支架，并用三維支架與旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)系統(tǒng)(RCCS)形成的三維培養(yǎng)體系(3D)來培養(yǎng)臍血分離的CD34+細(xì)胞，觀察臍血干細(xì)胞向血小板分化的情況。
　　方法:
　　1、冷凍干燥法制備不同濃度配比的殼聚糖-明膠支架，掃描電鏡觀察支架表面特征，測(cè)量支架的孔徑大小、并計(jì)算孔隙率、吸水率以及相容性測(cè)定，選取適合臍血干細(xì)胞生長(zhǎng)的支架。
　　2、用磁珠分選的方法對(duì)人臍血CD34+細(xì)胞進(jìn)行分離鑒定，將

2、臍血CD34+細(xì)胞附著在殼聚糖-明膠支架上，放入RCCS系統(tǒng)進(jìn)行3D培養(yǎng)，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，掃描電鏡觀察細(xì)胞在支架上的粘附生長(zhǎng)狀況，MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞標(biāo)志物，以及對(duì)分化所得的血小板進(jìn)行形態(tài)及功能鑒定，并與二維培養(yǎng)體系(2D)進(jìn)行比較。
　　結(jié)果:
　　1、成功構(gòu)建殼聚糖-明膠支架，選用殼聚糖、明膠各0.5g，預(yù)凍溫度為-30℃條件下制備支架，孔徑為(86±21)μm、吸水率為(87.62±10.1

3、9)％、孔隙率為(92.56±1.12)％，細(xì)胞相容性好，無毒副作用，適宜臍血干細(xì)胞培養(yǎng)用三維支架。
　　2、磁珠分選出臍血CD34+細(xì)胞，將細(xì)胞以5×104/ml的種植率種植在2D和3D體系中。掃描電鏡觀察細(xì)胞粘附于支架上，生長(zhǎng)狀況良好;3D培養(yǎng)第8dCD34+細(xì)胞可增殖(87.02±4.35)倍，2D培養(yǎng)到第5d達(dá)到峰值，細(xì)胞可增殖(20.78±5.03)倍，兩者間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);流式檢測(cè)細(xì)胞膜表面標(biāo)志物CD4

4、1+CD61+，培養(yǎng)到第7d、14d，3D體系測(cè)得的的結(jié)果為(28.70±1.75)、(82.40±2.91)）％，2D體系中測(cè)得的結(jié)果為(27.18±2.63)、(80.33±3.56)）％;3D培養(yǎng)系統(tǒng)所得類血小板顆粒較2D多，3D培養(yǎng)系統(tǒng)所得類血小板顆粒細(xì)胞數(shù)為(31.60±0.74)×106/ml，2D培養(yǎng)條件所得類血小板顆粒細(xì)胞數(shù)為(7.91±0.93)×106/ml，其黏附率為(43.05±1.93)％，2D為(41.37±