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文檔簡介
1、番茄(Lycopersicon esculentum L.)是世界上重要的茄科蔬菜作物之一,其種植面積大,市場上種類繁多,極其容易造成品種的混雜;同時番茄具有較強的雜種優(yōu)勢,目前市場上廣泛利用的均為雜交一代的種子,由于雜交種多是利用人工制種,質(zhì)量難以控制,時常發(fā)生偽劣種子上市,極易給生產(chǎn)帶來重大損失。因此準確、迅速、簡便地鑒定番茄品種與檢測遺傳純度是當前蔬菜生產(chǎn)和種子工作的重要內(nèi)容。 本研究對影響PCR反應的主要因子—模板DNA
2、、引物、dNTPs和Mg<'2+>濃度進行分析,建立起了適合于番茄基因組DNA的RAPD與SRAP-PCR反應體系。RAPD反應體系(18μl)為隨機引物0.4-0.6μmol·L<'-1>,dNTPs 0.15~0.2mmol·L<'-1>,Mg<'2+> 2.0mmol·L<'-1>,模板DNA 36~360ng,TaqDNA聚合酶0.8U;SRAP反應體系(10μL)為引物0.25μmol·L<'-1>,dNTPs 0.05~0.
3、2 mmol·L<'-1>,Mg<'2+>1.5~3.0 mmol·L<'-1>,模板DNA為10~20 ng,TaqDNA聚合酶0.5U。同時對PCR反應擴增程序中的復性溫度進行了梯度PCR,試驗表明,37℃的退火溫度適合于番茄RAPD分析,而SRAP中退火溫度在引物Tm值的一定范圍內(nèi)差異不明顯。 利用RAPD、ISSR、SSR三種分子標記技術(shù)對‘合作903’、‘合作906’、‘蘇粉8號’和‘蘇粉9號’4個番茄雜交種進了種子遺
4、傳純度的鑒定。共選用321個引物(218RAPD,54 ISSR,和49 SSR),進行4個番茄雜交種及其親本特異標記的篩選。利用所得到能同時獲得父母本特異性標記的共顯性引物對4個雜交種的210個單株分別進行了純度鑒定;在‘合作906’的RAPD分析中也分別運用了產(chǎn)生一偏父與偏母型標記的引物組合對其進行了鑒定。結(jié)果表明分子鑒定與田間鑒定純度有較好的一致性??梢杂梅肿訕擞浖夹g(shù)來代替田間純度鑒定,克服其周期長、勞動力大、易受環(huán)境條件影響準確
5、性差等缺點,從而準確、簡便、迅速地進行番茄種子純度鑒定。 利用基因組DNA的RAPD、ISSR與SRAP分子標記技術(shù),對32個番茄主要品種進行了指紋圖譜的分子標記分析,分別構(gòu)建了品種的三種分子標記數(shù)字化核酸指紋。結(jié)果表明各番茄品種遺傳多樣性在分子水平上差異不大,利用任何一個單一引物都不能將所有供試品種區(qū)分開,最高鑒別效率的引物RP408與IS35也只能區(qū)別其中的8個品種;同時聚類分析表明,分子標記技術(shù)在一定程度上能夠揭示品種之間
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