1、Toll樣受體是目前研究最清楚的一類模式識(shí)別受體，它能識(shí)別多種病源微生物相關(guān)的分子模式，并在機(jī)體抗感染免疫中發(fā)揮重要作用。但是，越來(lái)越多的證據(jù)表明，Toll樣受體與機(jī)體的自身耐受及一些自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展也有密切的關(guān)系。一方面，不適當(dāng)?shù)腡oll信號(hào)能破壞機(jī)體自身耐受并啟動(dòng)或者加速一些自身免疫性疾病進(jìn)程，比如自身免疫性糖尿病、炎癥性腸病、多發(fā)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等。另一方面，Toll信號(hào)在某些情況下也能促進(jìn)機(jī)體自身耐受，從而阻止或

2、者延遲自身免疫性疾病進(jìn)程。但是TLR信號(hào)促進(jìn)或破壞自身耐受的機(jī)制目前尚不清楚。本研究旨在進(jìn)一步探討Toll樣受體在機(jī)體自身耐受中的作用，尤其是深入探討TLR信號(hào)影響自身耐受的機(jī)制。本研究獲得的主要結(jié)果可以分成以下三部分： 1.TLR3信號(hào)誘導(dǎo)的小腸粘膜損傷模型的建立及損傷機(jī)制初步探討：Toll樣受體影響腸粘膜穩(wěn)態(tài)的機(jī)制尚不清楚。本部分研究旨在以腸粘膜為平臺(tái)，建立一種TLR信號(hào)過(guò)度活化誘導(dǎo)的自身免疫性損傷模型，并初步探討損傷的機(jī)制

3、。小鼠被分別注射TLR2、TLR3、TLR4和TLR9對(duì)應(yīng)的配體。結(jié)果表明只有TLR3配體poly Ⅰ：C能誘導(dǎo)嚴(yán)重的特異性小腸粘膜損傷。而且，輪狀病毒的基因組雙鏈RNA也能誘導(dǎo)類似的小腸粘膜損傷。結(jié)果還表明poly Ⅰ：C能誘導(dǎo)小腸上皮細(xì)胞(IECs)產(chǎn)生大量IL-15，且用anti-IL-15Rα抗體阻斷IL-15的作用能保護(hù)poly Ⅰ：C誘導(dǎo)的小腸粘膜損傷。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)表明，IL-15能誘導(dǎo)小腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(IELs)表達(dá)NK1

4、．1，并增強(qiáng)其對(duì)IECs的殺傷能力。用anti-NK1．1抗體清除NK1．1<'+>細(xì)胞能減輕poly Ⅰ：C誘導(dǎo)的損傷，但是用anti-AsGM1抗體清除NK細(xì)胞卻沒(méi)有效果。此外，通過(guò)對(duì)CD<'3+>NK1．1<'+>IELs的表型分析發(fā)現(xiàn)這群細(xì)胞屬于CD8αα<'+>IELs亞群，并且可以通過(guò)IECs分泌的IL-15由CD<'3+>NK1．1<'->IELs誘導(dǎo)而來(lái)。另外，在TLR3<'-/->鼠中，poly Ⅰ：C誘導(dǎo)的小腸損傷明

5、顯減輕。本研究建立了一個(gè)TLR3信號(hào)誘導(dǎo)的自身免疫性損傷模型，并首次報(bào)道了CD8αα<'+>IELs對(duì)腸粘膜穩(wěn)態(tài)的破壞作用。 2.NKG2D識(shí)別介導(dǎo)TLR3信號(hào)誘導(dǎo)的小腸粘膜損傷：Toll樣受體與NK細(xì)胞受體是天然免疫當(dāng)中最重要的兩類受體。體外實(shí)驗(yàn)表明，TLR信號(hào)能誘導(dǎo)單核細(xì)胞或者肌細(xì)胞上調(diào)一些NK細(xì)胞活化性受體配體的表達(dá)，但是TLR信號(hào)這種效應(yīng)的生理意義，尤其是在機(jī)體自身耐受中的作用尚不清楚。本部分研究旨在探討NK細(xì)胞受體是否

6、參與TLR3信號(hào)誘導(dǎo)的小腸粘膜損傷。結(jié)果表明TLR3信號(hào)不僅能通過(guò)誘導(dǎo)IECs分泌的IL-15上調(diào)NK細(xì)胞活化性受體NKG2D在CD8αα<'+>IELs上的表達(dá)，還能夠直接作用于IECs，誘導(dǎo)其表達(dá)NKG2D的配體Rael。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明，用抗體阻斷NKG2D與Rael之間的作用不僅能夠有效抑制IELs對(duì)IECs的殺傷，還能夠保護(hù)poly Ⅰ：C誘導(dǎo)的小腸粘膜損傷。本研究首次證明TLR信號(hào)可以通過(guò)NKG2D介導(dǎo)自身免疫損傷，從而提示我

7、們TLR信號(hào)能通過(guò)誘導(dǎo)NK細(xì)胞活化性受體的配體在實(shí)質(zhì)細(xì)胞上表達(dá)破壞自身耐受。 3.TLR3信號(hào)持續(xù)活化促進(jìn)自身耐受并阻止NOD小鼠自發(fā)糖尿病：TLR信號(hào)不僅能破壞自身耐受，越來(lái)越多的文章也報(bào)道了Toll樣受體在調(diào)節(jié)免疫耐受，抑制自身免疫性疾病發(fā)生發(fā)展方面同樣具有重要作用，但是機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。本部分研究旨在以NOD小鼠為研究平臺(tái)，探討持續(xù)TLR信號(hào)活化促進(jìn)自身耐受的機(jī)制。結(jié)果驗(yàn)證了poly Ⅰ：C預(yù)先注射能阻止NOD小鼠自發(fā)糖

8、尿病，并進(jìn)一步證明poly Ⅰ：C長(zhǎng)期處理能誘導(dǎo)小鼠脾臟和胰腺形成偏向Th2的環(huán)境，且這種效果以及poly Ⅰ：C對(duì)糖尿病的保護(hù)都依賴NK細(xì)胞的存在。此外，長(zhǎng)期poly Ⅰ：C刺激誘導(dǎo)NK細(xì)胞形成一種類似“NK3”樣的表型，并能通過(guò)分泌TGF-β抑制針對(duì)胰島抗原的Th1類反應(yīng)。本研究證明持續(xù)TLR3信號(hào)活化能在NOD小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)一種具有調(diào)節(jié)功能的“NK3”樣NK細(xì)胞，繼而抑制過(guò)度的Th1反應(yīng)并阻止NOD小鼠自發(fā)糖尿病。 綜上所述