1、日本血吸蟲?。╯chistosomiasis）在我國南方是一種廣泛分布和嚴重危害人民身體健康的人畜共患寄生蟲病。目前主要的防制措施是控制傳染源，其中以吡喹酮治療帶蟲宿主是重要的環(huán)節(jié)。但實踐表明化療不能根除血吸蟲病，包括吡喹酮，亦不能防止血吸蟲病的再感染，特別是反復感染后長期用藥，可能會引起產(chǎn)生耐藥性的危險，因此加強對新抗蟲藥物及疫苗的研究開發(fā)是當前血吸蟲病防控研究的重要方向。本文根據(jù)實驗室前期蛋白質組研究的結果，選擇日本血吸蟲章魚胺受體

2、（octopamine recptor,OAR）和蛋白質合成延伸因子（elongation factors,EF）基因，分析了其在日本血吸蟲中的特性，在大腸桿菌中表達了重組蛋白并純化得到了具有較高抗原性的融合蛋白，在小鼠日本血吸蟲病模型中評估了其的保護效果，研究了免疫保護機制。并利用抑制藥物觀察了章魚胺受體在血吸蟲生長發(fā)育中的作用。
　　1.日本血吸蟲神經(jīng)受體OAR的特性研究
　　利用 PCR克隆了日本血吸蟲 OAR的 cD

3、NA，序列分析顯示 SjOAR共1422bp，編碼474個氨基酸。應用實時定量PCR分析日本血吸蟲7、14、21、28d童蟲和35、42d成蟲及42d雌蟲和雄蟲的SjOAR轉錄情況，結果顯示章魚胺受體基因在日本血吸蟲各期童蟲和成蟲中轉錄差異不大，28d童蟲表達量較高，雌蟲表達量比雄蟲高。根據(jù)抗原性和保守性分析結果，選擇其中一段261bp的序列，成功地構建了重組表達質粒SjOAR-pET-32a，在大腸桿菌BL21（DE3）中進行表達并純

4、化到重組蛋白，分子量為32kD，Western blotting分析表明該重組蛋白具有較好的抗原性和免疫原性。應用SjOAR-pET-32a重組蛋白免疫小鼠制備的多克隆抗體進行免疫組化和免疫熒光技術對該蛋白的表達部位進行分析，結果顯示章魚胺受體在日本血吸蟲體內表達量比較低，在日本血吸蟲緊鄰表膜附近以及生殖系統(tǒng)中分布較多，其它組織部分分布較少。
　　用純化的SjOAR-pET-32a重組蛋白免疫BALB/c小鼠進行小鼠日本血吸蟲病免

5、疫保護試驗，結果與空白對照組相比，重組蛋白 SjOAR-pET-32a誘導了28.12％的減蟲率和38.20%的肝臟減卵率，差異極顯著（p<0.01）。重組蛋白在三次免疫小鼠后均誘導產(chǎn)生了高滴度的特異性IgG抗體。免疫機制研究表明，該蛋白誘導了小鼠Th1和Th2混合的免疫反應。應用章魚胺受體抑制藥物進行的小鼠體內試驗結果表明，與PBS對照組相比，尾靜脈注射cis(Z)-flupenxio組獲得了30.90%的減蟲率，47.31%的肝臟減

6、卵率，差異極顯著（P﹤0.01）；25d cis(Z)-flupenxio組獲得了15.49%的減蟲率，49.95%的肝臟減卵率，差異極顯著（P﹤0.01）；Mianserin組獲得了20.27%的減蟲率，28.87%的肝臟減卵率，差異不顯著（P﹥0.05）。結果表明日本血吸蟲章魚胺受體有作為抗血吸蟲藥物研究靶標的潛力。
　　2.日本血吸蟲EF的克隆表達及免疫保護的初步評估
　　應用PCR克隆了日本血吸蟲延伸因子的基因片段，

7、大小為642bp，包含整個ORF。通過序列比對和結構域分析，推測該基因可能為EF-β型基因。成功地構建了含SjEF的重組表達質粒SjEF-pET-28a，對重組蛋白進行純化并制備了多克隆抗體。Western blotting分析表明該重組蛋白具有較好的抗原性和免疫原性。免疫組化分析顯示SjEF主要分布在日本血吸蟲表膜和實質部分，在肌肉組織中分布均勻。用該重組蛋白免疫小鼠后，可誘導小鼠產(chǎn)生高水平的特異性IgG抗體。進一步測定三次免疫后抗