1、研究背景：肺癌已逐漸成為威脅人類健康的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率與死亡率逐年增加,己躍至癌癥死亡率的首位,其中非小細胞肺癌已占所有肺癌病例的80％以上。肺癌的治療多以手術、放療、化療等為首要的方式,但對于一些中晚期肺癌患者,往往已經失去了手術治療的機會,與此同時,放化療既具有較嚴重的副反應,又容易出現放化療抗性而最終導致治療失敗,從而極大的限制了肺癌患者的治療,導致其預后非常差,致使肺癌患者五年存活率仍低于15％。環(huán)磷酰胺是一種傳統(tǒng)的抗腫瘤

2、化療藥物,其在非小細胞肺癌患者的治療中廣泛應用,它通過干擾DNA功能,與其發(fā)生交叉聯結,抑制DNA合成等機制殺滅腫瘤細胞,但是環(huán)磷酰胺是非特異性的化療藥,其在殺傷腫瘤細胞的同時也損傷正常細胞,致使機體免疫功能下降,免疫監(jiān)視功能降低,加速腫瘤細胞逃亡、存活及增殖,最終導致治療失敗。中醫(yī)中藥在抗腫瘤細胞生長與轉移、增強化療療效與降低化療毒性、提高患者免疫功能、改善患者癥狀以及提高患者生存質量等方面有其自身的優(yōu)勢。蝎毒多肽提取物便是本實驗室從

3、東亞鉗蝎蝎毒中提取并純化的有效抗腫瘤中藥成分,其為含50～60個氨基酸的多肽混合物,它是一種耐熱、pH穩(wěn)定的蛋白質,相對分子質量為(6～7)×103,具有多種生物活性。當前研究證實,蝎毒多肽提取物在體內外均具有顯著的抗腫瘤作用,其可改善荷瘤機體的免疫功能狀態(tài),并能與放化療聯合應用產生良好的協(xié)同抗腫瘤效應,但是目前蝎毒多肽提取物的抗腫瘤細胞機制尚未完全闡明。因此本實驗通過觀察蝎毒多肽提取物聯合環(huán)磷酰胺對Lewis肺癌細胞免疫逃逸相關因子的

4、影響,探討蝎毒多肽提取物聯合環(huán)磷酰胺抗腫瘤細胞的機制。
　　 目的：觀察蝎毒多肽提取物(PESV)聯合環(huán)磷酰胺(CTX)對腫瘤微環(huán)境中細胞因子TGF-β1、VEGF、PCNA的表達及對樹突狀細胞(DC)分化成熟的影響。進而揭示PESV抗腫瘤作用的機制,為非小細胞肺癌患者(NSCLC)中西藥聯合治療提供實驗依據。
　　 方法：1.建立Lewis肺癌小鼠皮下荷瘤模型,隨機分為荷瘤對照組、化療(CTX)組、PESV組和實驗組(

5、CTX+PESV組)。記錄腫瘤生長曲線,測量腫瘤體積并計算抑瘤率,觀察PESV對腫瘤生長的抑制作用。2.常規(guī)HE染色,光鏡下觀察瘤組織病理變化。3.免疫組化法檢測瘤組織中血管內皮生長因子(VEGF)、轉化生長因子β1(TGF-β1)、增殖細胞核抗原(PCNA)的表達。4.逆轉錄PCR檢測瘤組織中血管內皮生長因子(VEGF-A)、轉化生長因子β1(TGF-β1)5.免疫熒光化學法檢測瘤組織中浸潤的DC表面共刺激分子B7-1、B7-2的表達

6、。6.免疫熒光化學法檢測瘤組織中浸潤的DC表面分子B7-1和MHC classⅡ、B7-2和MHC classⅡ的共表達
　　 結果：1.藥物干預對Lewis肺癌的影響干預21d后,與荷瘤對照組相比較,PESV組、化療組和實驗組的小鼠體內Lewis肺癌生長均受到抑制,其抑制率分別為31.57％、47.32％、53.63％(P0.05)。2. PESV對小鼠Lewis肺癌瘤體中TGF-β1、VEGF、PCNA表達的影響 TGF-β

7、1、VEGF的棕黃色陽性表達顆粒主要分布于腫瘤細胞胞質中,PCNA棕黃色陽性表達顆粒主要分布于細胞核內。其中荷瘤對照組陽性表達率最高,表達+++以上者高達80％;CTX組和PESV組陽性表達率次之,表達+++以上者為60％;而實驗組的陽性表達率僅為30％。實驗組與荷瘤對照組相比較差異非常顯著(P0.01)。3.瘤組織中DC表型B7-1、B7-2檢測熒光顯微鏡下觀察,綠色熒光信號代表陽性表達。與荷瘤對照組相比較,PESV組中B7-1、B7

8、-2的綠色熒光信號強度有所增強;化療組中綠色熒光信號強度有所下降,而實驗組中熒光信號表達強度與化療組相比,強度和表達量均有所增加。4.瘤組織中DC表型B7-1和MHC classⅡ、B7-2和MHC classⅡ雙標檢測明亮的綠色熒光信號代表B7-1、B7-2表型陽性;明亮紅色熒光信號代表MHC classⅡ表型陽性;黃色熒光信號代表B7-1和MHC classⅡ或B7-2和MHC classⅡ雙陽性。熒光顯微鏡下觀察,各組瘤組織中均有

9、B7-1和MHC classⅡ、B7-2和MHC classⅡ的雙陽性表達存在,與荷瘤對照組相比較,PESV組黃色熒光信號有所增加;化療組中黃色熒光信號有所下降,與化療組相比,實驗組中黃色熒光信號的強度和表達量均有所增加。5. PESV對小鼠Lewis肺癌瘤組織中TGF-β1和VEGF-A mRNA表達量的影響與荷瘤對照組相比,PESV組和化療組中TGF-β1和VEGF-A的mRNA表達量均降低(P均0.05);與PESV組和化療組相比