1、目的：
　　探討六亞甲基二乙酰胺(HMBA)對K562細胞的作用效果以及轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)/SMAD信號通路在此過程中所發(fā)揮的作用。
　　方法：
　　采用六亞甲基二乙酰胺(HMBA)和人慢性粒細胞白血病K562細胞株建立體外模型，采用不同濃度的HMBA溶液對K562細胞株進行藥物處理，采用MTT實驗檢測HMBA對K562細胞株的增殖抑制程度以及這種增殖抑制作用是否存在時間劑量依賴性，如果存在時間劑量依賴

2、性則求出HMBA溶液作用于K562細胞72小時的半數(shù)抑制濃度(IC50)。采用臺盼藍染色進行活細胞計數(shù)來進一步驗證適宜濃度的HMBA溶液對K562細胞的增殖抑制效果。當K562細胞經(jīng)過適宜濃度的HMBA溶液處理72小時以后，采用Wright染色法觀察K562細胞的形態(tài)學(xué)變化并且運用流式細胞術(shù)檢測其細胞周期的變化情況。同時采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測在HMBA作用于K562細胞的過程中與TGF-β1/SMAD信號通路密切相

3、關(guān)的幾種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子在基因表達上的變化情況，包括TGF-β1、SMAD3、SMAD4和EVI1基因在mRNA水平上相對表達量的變化趨勢。
　　結(jié)果：
　　MTT實驗結(jié)果表明HMBA能夠較顯著地抑制K562細胞的增殖，并且這種增殖抑制作用能夠呈現(xiàn)出較明顯的時間劑量依賴性，即細胞增殖抑制率隨著時間逐漸延長或劑量逐漸加大而逐漸增高。HMBA作用于K562細胞72小時的半數(shù)抑制濃度(IC50)約為2 mmol/L。K562細胞經(jīng)過2

4、mmol/L的HMBA溶液作用72小時以后，臺盼藍染色和活細胞計數(shù)實驗進一步證實了適宜濃度的HMBA溶液對K562細胞的確存在較明顯的增殖抑制效果，并且與MTT實驗所得出的結(jié)果基本一致;Wright染色結(jié)果顯示K562細胞發(fā)生了較明顯的形態(tài)學(xué)變化并且進一步向終末粒細胞分化;流式細胞術(shù)結(jié)果表明K562細胞的細胞周期在一定程度上被阻滯于G0-G1期，而處于S期和G2-M期的細胞比例降低;RT-PCR實驗結(jié)果表明在此過程中TGF-β1、SMA

5、D3和SMAD4基因在mRNA水平上的相對表達量逐漸增高，而EVI1基因在mRNA水平上的相對表達量則逐漸降低。
　　結(jié)論：
　　HMBA能夠較顯著地抑制K562細胞的增殖，并且這種增殖抑制作用能夠呈現(xiàn)出較明顯的時間劑量依賴性，即細胞增殖抑制率隨著時間逐漸延長或劑量逐漸加大而逐漸增高。用適宜濃度的HMBA溶液對K562細胞進行適當時間的處理后，在一定程度上能夠通過阻滯細胞周期來降低增殖期細胞的比例，同時能夠促進K562細胞向