1、目的：皮瓣遠(yuǎn)端壞死是整形重建外科經(jīng)常遇到的問題。研究證實(shí)，一些生長(zhǎng)因子如VEGF及bFGF可通過血管生成等機(jī)制提高皮瓣的存活率。基礎(chǔ)研究證明，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Hapatocyte Growth Factor，HGF)具有更強(qiáng)大的促進(jìn)血管生成作用，但相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)皮瓣存活的促進(jìn)作用尚不明確。為發(fā)掘HGF在促進(jìn)隨意皮瓣遠(yuǎn)端存活方面的作用，本研究擬建立超長(zhǎng)皮瓣動(dòng)物模型觀察HGF對(duì)促進(jìn)超長(zhǎng)皮瓣存活的影響，并通過實(shí)驗(yàn)病理技術(shù)觀察用藥與否的試驗(yàn)動(dòng)物

2、皮瓣的組織變化及血管生成情況。 方法：以20只4月齡、雄性、300-350g體重的Wistar大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，分別建立大鼠背部8cmx2cm(長(zhǎng)寬比為4:1)隨意皮瓣動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為二組，每組10只，分別為HGF組、生理鹽水組(對(duì)照組)。HGF(購(gòu)自英國(guó)Pepro Tech公司)以無菌生理鹽水配成濃度為100ng/ml的工作溶液。試驗(yàn)組大鼠皮瓣掀起后即刻用4-0絲線原位縫合，用微量注射器抽取HGF工作溶液1ml，選擇距

3、皮瓣邊緣0.5cm處均勻分布的10點(diǎn)垂直注入受區(qū)表面，每點(diǎn)注射0.1ml。同法用微量注射器取用生理鹽水1ml注射對(duì)照組大鼠皮瓣。兩組術(shù)后6小時(shí)、12小時(shí)經(jīng)背部重復(fù)給藥。術(shù)后每天觀察皮瓣顏色、質(zhì)地、溫度、毛細(xì)血管回流等。術(shù)后7天，將大鼠處死，以透明紙繪出皮瓣模型，將壞死區(qū)與成活區(qū)界限標(biāo)出，剪成兩部分。用電子稱稱量，以稱紙得出的重量代表面積的方法計(jì)算，按(成活部分/設(shè)計(jì)部分)×100％計(jì)算出成活面積比。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠術(shù)后7天取距蒂部4c

4、m處皮瓣中段2mm橫斷組織，10％甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，HE染色，光鏡下觀察其組織學(xué)變化。由于血管壁有抗原CD34，為此我們使用免疫組織化學(xué)分析方法檢測(cè)CD34的陽性表達(dá)，標(biāo)記皮瓣皮下平均血管數(shù)目。應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析：組與組之間的比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為有顯著性差異。 結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：術(shù)后1天，兩組皮瓣彈性較好，皮瓣下無明顯積血積液，皮溫、色澤正常，兩組差別不顯。術(shù)后

5、4天，各組皮瓣遠(yuǎn)端出現(xiàn)不同程度色澤變暗，輕度水腫。術(shù)后7天，各組皮瓣壞死與成活區(qū)分界明顯。術(shù)后7天，HGF組皮瓣成活率為75.13+3.02％，明顯高于生理鹽水組(62.01±2.51％)，有非常顯著性差異(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比表皮萎縮、皮下組織水腫均減輕，血管擴(kuò)張、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)均減少。光鏡下病理可見：實(shí)驗(yàn)組表皮萎縮不明顯，皮下組織無明顯水腫，血管輕度擴(kuò)張，無明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；而對(duì)照組表皮萎縮明顯，表皮變薄，皮下組織水腫和

6、血管擴(kuò)張明顯，有明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和皮下纖維組織增生。對(duì)照組皮瓣存活區(qū)新生血管和肉芽組織增生明顯少于實(shí)驗(yàn)組。免疫組化檢測(cè)CD34標(biāo)記的皮瓣微血管數(shù)目，400倍光鏡下觀察切片，隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行血管斷而計(jì)數(shù)，實(shí)驗(yàn)組為(136.25±22.35)個(gè)，對(duì)照組為(89.55±14.44)個(gè)，實(shí)驗(yàn)組微血管數(shù)目明顯多于對(duì)照組，兩組之間有顯著差異(P＜0.05)。 這一結(jié)果提示HGF有改善皮瓣遠(yuǎn)端血供，促進(jìn)隨意皮瓣存活的作用。HGF具有促進(jìn)血

7、管內(nèi)皮細(xì)胞增生、遷移和新生血管形成的作用，可用于治療各種原因所致組織缺血性疾?。荒苷{(diào)節(jié)膠原纖維的合成和炎性反應(yīng)，促進(jìn)組織細(xì)胞的發(fā)生、生存和再生，在治療創(chuàng)傷愈合、防治組織纖維化中起著重要作用。我們推測(cè)，HGF對(duì)超長(zhǎng)比例隨意皮瓣的存活改善作用主要通過以上機(jī)制尤其是促進(jìn)皮瓣遠(yuǎn)端血管生成作用實(shí)現(xiàn)。 結(jié)論：肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子是較強(qiáng)的血管生成因子，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，管腔形成，促進(jìn)血管新生，較早建立有效血液循環(huán)。隨意皮瓣下局部注射肝細(xì)胞生長(zhǎng)因