1、前列腺素類可以抑制睫狀肌細(xì)胞內(nèi)TIGR蛋白的表達(dá),這可能是其降壓作用的一個(gè)中間環(huán)節(jié).而藥物作用于小梁網(wǎng)降壓的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步深入研究.該試驗(yàn)擬用糖皮質(zhì)激素地塞米松,誘導(dǎo)TIGR蛋白在牛眼小梁網(wǎng)組織的表達(dá),并試驗(yàn)各種促進(jìn)小梁網(wǎng)通路房水外流的降眼壓藥物,主要是前列腺素類藥物對(duì)該蛋白的作用,為進(jìn)一步闡述TIGR基因及其編碼產(chǎn)物的功能補(bǔ)充證據(jù),同時(shí)也從另一方面完善這類抗青光眼藥物的作用機(jī)制.第一部分:合成TIGR抗原性多肽,制備并鑒定TIG

2、R多克隆抗體 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道方法,合成具有較高抗原性、特異性的多肽DKSVLEEEKKRLRQ.用其免疫新西蘭白兔2只,采用多點(diǎn)皮下注射的方法,采集血清來制備多克隆抗體.用Elisa試驗(yàn)鑒定制備的抗體.第二部分:培養(yǎng)牛眼小梁細(xì)胞并傳代 按古亞娟等方法,用DMEM-F12培養(yǎng)基培養(yǎng)原代牛眼小梁細(xì)胞并傳代,第3代至第5代細(xì)胞用于試驗(yàn).第三部分:地塞米松誘導(dǎo)TIGR的表達(dá) 將地塞米松(dexamethasone)溶于二甲基亞颯(DMSO)溶液配

3、成儲(chǔ)存液,按不同濃度均勻混入培養(yǎng)基內(nèi)與小梁細(xì)胞共孵2周,又以5μM地塞米松作用不同時(shí)間誘導(dǎo)TIGR蛋白的表達(dá).第四部分:前列腺素類等藥物對(duì)TIGR蛋白表達(dá)的影響 取3-5代成熟小梁細(xì)胞,分別加入前列腺素類(PGE、PGF2 α、xalatan、lμmigan)和nifedipine等預(yù)孵2個(gè)小時(shí),再加入5μM地塞米松(dexamethasone)作用2周時(shí)間,用制備的TIGR多克隆抗體,通過細(xì)胞免疫熒光組化和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-

4、PCR)方法及Western blotting蛋白免疫印跡方法等檢測TIGR轉(zhuǎn)錄水平及表達(dá)水平的變化.結(jié)論:1)地塞米松可以在體外誘導(dǎo)TIGR蛋白在牛眼小梁細(xì)胞內(nèi)的表達(dá);TIGR蛋白的表達(dá)量具有地塞米松劑量和時(shí)間的依賴性;2)前列腺素類包括PGE、PGF2 α、lumigan、xalatan和鈣通道阻滯劑nifedipine對(duì)TIGR蛋白在體外牛眼小梁細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)具有抑制作用;3)地塞米松在體外誘導(dǎo)TIGR蛋白的表達(dá)同時(shí)伴有信號(hào)通路蛋白