上海地區(qū)豬戊型肝炎分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、戊型肝炎(Hepatitis E,HE)屬于人畜共患病,是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起,該病對人類健康具有很大的危害。HEV在動物宿主中以豬的感染率最高,病毒載量最大,而且從中分離到的病毒和人源毒株也有較高的同源性。因此,摸清豬群中該病的存在狀況,對防控人戊型肝炎的發(fā)生具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。本試驗(yàn)采用RT-nPCR的方法,對上海地區(qū)豬群糞便中的戊型肝炎病毒RNA進(jìn)行了檢測,并通過測序和系統(tǒng)進(jìn)化分析

2、,探明了上海地區(qū)豬場中戊型肝炎病毒的存在情況,該研究結(jié)果為有效防制戊型肝炎發(fā)生提供了科學(xué)依據(jù)。 試驗(yàn)分為兩部分: 1.基因3型豬戊型肝炎病毒的分離鑒定本試驗(yàn)從上海地區(qū)幾個豬場中隨機(jī)采集了46份糞便樣品,制備成10%的糞便稀釋液,提取總RNA,應(yīng)用特異性兼并引物進(jìn)行RT-PCR,反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA產(chǎn)物,通過四條兼并引物進(jìn)行nested-PCR.操作,擴(kuò)增HEV基因組目的片斷,瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測,電泳檢測的陽性樣品擴(kuò)大

3、體系擴(kuò)增目的片斷,克隆到pMD19-T載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a,然后進(jìn)行藍(lán)白斑篩選,挑選鑒定陽性克隆,進(jìn)行測序。序列通過CLUSTAL-W(version1.8)、Mega(version 3.1)和Lasergene(version7.0;DNAstar)等生物學(xué)軟件進(jìn)行比對、遺傳距離計算、N-J法進(jìn)化樹構(gòu)建,從而確定病毒的進(jìn)化地位。結(jié)果表明,46個樣品中的12份為陽性,測序和進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn),有兩株戊型肝炎病毒為基因3型,分別命名為

4、CSH-3和CSH-4。為了進(jìn)一步研究這兩株病毒的特性,對基因組另一個片斷進(jìn)行了擴(kuò)增,同樣鑒定為基因3型。這是中國大陸首次發(fā)現(xiàn)基因3型戊型肝炎病毒。 2.上海地區(qū)豬戊型肝炎的分子流行病學(xué)調(diào)查為了能夠準(zhǔn)確的了解上海地區(qū)戊型肝炎在豬群中的流行情況,從上海市10個轄區(qū)的37個豬場中檢測了426份糞便樣品。通過RT-nPCR的方法,擴(kuò)增HEV ORF2的部分片斷,再通過測序和系統(tǒng)進(jìn)化分析。結(jié)果表明,426份樣品中有111份為HEV陽性,

5、各個區(qū)的陽性率均在0.0%~41.7之間。從每個豬場陽性樣品中隨機(jī)挑選1~2個擴(kuò)大體系擴(kuò)增,將擴(kuò)增的片斷克隆T載體,進(jìn)行測序。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明,其中的10株屬于基因4型,而且和從上海地區(qū)人體內(nèi)分離到的兩株戊肝病毒有很高的同源性。其余的22株屬于基因3型,在進(jìn)化樹中,形成一個新的分支,但是和一株美國分離到的豬戊型肝炎病毒有較高的同源性。 該研究結(jié)果證明基因3型HEV在上海分布已較為廣泛,但在前期國內(nèi)的研究結(jié)果顯示,中國境內(nèi)豬群中只

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