1、本文主要從以下幾個方面展開論述:
　　第一部分 BPA對大鼠睪丸支持細胞的影響及其機制研究
　　目的：雙酚A（Bisphenol A, BPA）是一種在外環(huán)境中廣泛存在的環(huán)境內分泌干擾物，可對雄性生殖系統(tǒng)產生影響，但其生殖毒性的機制研究還十分有限，本文旨在探討B(tài)PA暴露對大鼠睪丸支持細胞的影響及其機制的研究。
　　方法：采用不同終濃度的BPA（0、30、50及70mol/L）處理離體培養(yǎng)的支持細胞。采用MTT法測定細胞

2、活力；酶標儀檢測支持細胞內ROS的含量；采用SOD和MDA試劑盒檢測細胞總SOD活力及MDA含量；采用實時熒光定量PCR檢測支持細胞中Pten、Pdk1、Akt、cytochrome c、 Bax及procaspase-8的mRNA表達水平；采用Western blotting方法測定支持細胞中Pten、phospho-Akt、cytochrome c、Bax、Bcl-2蛋白表達水平以及凋亡相關蛋白procaspase-9和cleave

3、d caspase-3的表達水平；采用流式細胞術檢測支持細胞凋亡率，采用 AO/EB及Hoechst33258檢測支持細胞凋亡的形態(tài)學改變。
　　結果：50mol/L的BPA致支持細胞活力明顯下降(P<0.05)；與對照組相比，BPA暴露還可以顯著增加細胞內ROS的含量及支持細胞MDA的含量，顯著降低支持細胞 SOD活力(P<0.05)；不過，NAC的預處理則可顯著降低胞內ROS的含量(P<0.05)。
　　BPA暴露可誘導

4、大鼠睪丸支持細胞Pten、Pdk1、Akt mRNA、cytochrome c、Bax以及procaspase-8mRNA表達水平顯著增高(P<0.05)。但NAC預處理可以拮抗BPA誘導的Bax、procaspase-8及cytochrome c mRNA水平的改變(P<0.05)。
　　BPA暴露還可導致支持細胞Pten、cytochrome c、Bax的蛋白水平增加，而Phospho-Akt及Bcl-2蛋白水平下降(P<0.

5、05)；凋亡相關蛋白procaspase-9表達水平明顯下降，而cleaved caspase-3蛋白表達水平則顯著增高(P<0.05)。NAC預處理可以逆轉cytochrome c、Bax表達水平，但對Bcl-2水平的改變不明顯。
　　流式細胞術檢測結果表明BPA暴露可誘導支持細胞凋亡(P<0.05)。Hoechst及AO/EB雙染色結果也表明BPA可引起支持細胞核固縮，DNA斷裂等凋亡形態(tài)學改變。但是，抗氧化劑NAC可以明顯拮

6、抗BPA引起的細胞凋亡(P<0.05)。
　　結論：BPA暴露導致支持細胞的活力下降及細胞內氧化應激水平升高并誘導支持細胞凋亡，Pten/Akt信號通路在BPA誘導細胞凋亡中發(fā)揮重要作用，而ROS可以通過介導線粒體信號通路誘導細胞凋亡。
　　第二部分 BPA對青春前期SD大鼠睪丸細胞的影響及其機制研究
　　目的：旨在體外研究基礎上探討B(tài)PA對青春前期SD大鼠睪丸細胞的影響及其機制研究。
　　方法：對青春前期SD大

7、鼠按1ml/kg劑量，采用腹腔注射的方式進行BPA染毒，分組如下：溶劑對照組、2 mg/kg b.wt、10 mg/kg b.wt及50 mg/kg b.wt。染毒方式為隔天染毒，共10天，染毒結束后第二天處死動物。用westernblotting方法檢測睪丸組織中Pten、Phospho-Akt、Bax、cytochrome c、FasL及凋亡相關蛋白procaspase-3及cleaved caspase-3蛋白水平；用TUNEL法

8、檢測睪丸組織凋亡狀況；HE染色觀察大鼠睪丸組織病理結構的改變。
　　結果：與對照組相比，BPA的作用可導致睪丸組織中Pten、Bax、cytochrome c、FasL的蛋白表達量增加，凋亡相關蛋白cleaved caspase-3蛋白表達水平升高，而procaspase-3蛋白表達水平明顯降低(P<0.05)。不過，BPA暴露對Phospho-Akt蛋白表達水平無明顯影響；TUNEL檢測結果表明，BPA暴露可誘導睪丸生殖細胞凋亡