1、目的：血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）增殖是血管再狹窄的主要病理基礎(chǔ)。黃芩苷（baicalin）是從中草藥黃芩中分離出來(lái)的一種黃酮類(lèi)化合物。以往研究發(fā)現(xiàn)，黃芩苷對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用。但其是否影響血管內(nèi)皮損傷所誘導(dǎo)的血管內(nèi)膜增生尚不清楚。本研究從以下幾方面探討黃芩苷對(duì)血管新生內(nèi)膜形成的影響及其作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1 VSMC的培養(yǎng)：按貼塊法分離培養(yǎng)

2、VSMC，取3～6代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。傳代培養(yǎng)的VSMC生長(zhǎng)到80％～90％匯合時(shí)，給予不同濃度黃芩苷（5、10、20、40μmol/L）預(yù)處理。
　　 2 Western blot分析：取等量蛋白的提取液上樣，進(jìn)行SDS-PAGE。電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。隨后與相應(yīng)的一抗及二抗反應(yīng)，用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)抗原抗體結(jié)合區(qū)帶。用數(shù)碼成像分析系統(tǒng)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析。
　　 3球囊損傷模型的復(fù)制及分組
　　 將SD大鼠（250

3、～300g）常規(guī)麻醉消毒，沿頸部正中線切口，暴露左側(cè)頸外動(dòng)脈，在頸外動(dòng)脈剪一楔形切口，將球囊導(dǎo)管自切口插入至胸腹主動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，充盈球囊后反復(fù)回拉三次，退出，結(jié)扎頸外動(dòng)脈，關(guān)閉切口。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分假手術(shù)組、球囊損傷組、黃芩苷組。
　　 4標(biāo)本的處理
　　 于術(shù)后14天從股動(dòng)脈放血處死大鼠，分離頸總動(dòng)脈，制備病理切片。
　　 結(jié)果：
　　 1黃芩苷抑制PDGF誘導(dǎo)的VSMC增殖
　　 MTT分析結(jié)果表明，

4、黃芩苷能以濃度（5、10、20、40μmol/L）依賴(lài)的方式抑制VSMC增殖，具有明顯的量-效關(guān)系。
　　 2黃芩苷對(duì)VSMC增殖標(biāo)志基因PCNA表達(dá)的影響
　　 免疫細(xì)胞化學(xué)和Western blot分析顯示，正常細(xì)胞中PCNA呈低水平表達(dá)，PDGF（10 ng/ml）刺激后PCNA水平大幅度升高，而藥物預(yù)孵育則使PCNA水平下降。提示黃芩苷具有抑制PDGF誘導(dǎo)的VSMC增殖的作用。
　　 3黃芩苷抑制PDGF

5、激活的PDGFR/MEK/ERK1/2信號(hào)通路
　　 Western blot結(jié)果顯示，PDGF刺激細(xì)胞15 min，PDGFR磷酸化水平明顯升高；而經(jīng)黃芩苷預(yù)處理的VSMC，磷酸化的PDGFR呈濃度依賴(lài)性的降低；進(jìn)而對(duì)其下游的MEK、ERK1/2活性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)MEK和ERK1/2磷酸化程度也隨著藥物濃度的增加逐漸降低；但磷酸化的JNK、p38、Akt不受藥物處理的影響。提示黃芩苷是通過(guò)特異性抑制MEK/ERK1/2通路活化

6、來(lái)抑制PDGF誘導(dǎo)的VSMC的增殖。
　　 4黃芩苷抑制球囊損傷后血管內(nèi)膜的增生
　　 球囊損傷術(shù)后14天，黃芩苷組血管內(nèi)膜的增生程度較球囊損傷組明顯減輕，兩組的血管內(nèi)膜/中膜（I/M）厚度比分別為0.43±0.04和2.36±0.15，具有顯著性差異（P<0.01）。表明黃芩苷可以明顯抑制球囊損傷誘導(dǎo)的血管內(nèi)膜增生。
　　 5黃芩苷抑制新生內(nèi)膜中PCNA表達(dá)
　　 形態(tài)學(xué)分析顯示：正常血管內(nèi)膜中僅有少量

7、PCNA表達(dá)，球囊損傷14天后，血管中PCNA陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)明顯增多；而黃芩苷可明顯抑制PCNA的表達(dá)，與模型組相比PCNA陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)減少了53.4％，具有顯著性差異（P<0.01）。提示黃芩苷可抑制血管細(xì)胞的增殖活性。
　　 6黃芩苷抑制球囊損傷誘導(dǎo)的ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)
　　 免疫組織化學(xué)染色顯示：正常血管內(nèi)膜中可見(jiàn)極少量的ICAM-1和VCAM-1著色顆粒。球囊損傷14天后，兩種蛋白陽(yáng)性染色的細(xì)胞數(shù)及單

8、細(xì)胞染色強(qiáng)度均較正常組顯著增加。而黃芩苷能夠顯著抑制球囊損傷誘導(dǎo)的ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)，與模型組相比陽(yáng)性染色的細(xì)胞數(shù)分別降低了55.8±6.9％和57.2±5.5％，具有顯著性差異（P<0.01，P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1黃芩苷抑制PDGF誘導(dǎo)的VSMC增殖。
　　 2黃芩苷抑制VSMC增殖的機(jī)制與阻斷PDGFR/MEK/ERK1/2信號(hào)通路有關(guān)。
　　 3黃芩苷可預(yù)防內(nèi)皮損傷所