1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文BC047440基因調(diào)節(jié)肝癌增殖機(jī)制的初步研究姓名：黃小兵申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師：梁平20080501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文H 印G 2 細(xì)胞的的p 5 0 蛋白含量低于對(duì)照組。 ( 5 ) P g e n e s i l ．1 ．B C 0 4 7 4 4 0 ．s i R N A 沉默H 印G 2 細(xì)胞中的B C 0 4 7 4 4 0 基因后，H 印G 2 細(xì)胞中的N F ．1 c

2、 B 核轉(zhuǎn)位明顯低于野生株H 印G 億。 ( 6 ) P g e n e s i l ．1 ．B C 0 4 7 4 4 0 ．s i R N A 沉默B C 0 4 7 4 4 0 基因后H 印G 2 細(xì)胞的熒光素酶和海腎熒光素酶活性比值只有野生株的1 ／4 ，提示N F ．1 c B 活性明顯的受到抑制。( 7 ) 沉默B C 0 4 7 4 4 0 基因后發(fā)現(xiàn)有1 8 9 個(gè)基因差異表達(dá)，其中1 3 0 個(gè)基因上調(diào)表達(dá)差異達(dá)到兩倍

3、以上，5 9 個(gè)基因下調(diào)表達(dá)差異達(dá)到5 0 ％以上。對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)涉及到細(xì)胞分裂、細(xì)胞周期和調(diào)亡的相關(guān)基因表達(dá)的上調(diào)或者下調(diào)；影響信號(hào)通路相關(guān)基因的改變；還有藥物耐受、組蛋白、離子通道、D N A 損傷刺激和D N A 修復(fù)有關(guān)的基因等表達(dá)改變。( 8 ) 通過驗(yàn)證T 黜心6 的m R N A 的表達(dá)，結(jié)果證實(shí)與基因芯片結(jié)果類似，提示沉默后H 印G 2 細(xì)胞中T 黜心6 表達(dá)下降。結(jié)論： ( 1 ) 成功地構(gòu)建了P g e

4、 n e s i l ．1 ．B C 0 4 7 4 4 0 ．s i 砌叮A 真核表達(dá)載體，將之轉(zhuǎn)染到H 印G 2 細(xì)胞中可有效降低B C 0 4 7 4 4 0 蛋白的刪[ 礬A 的表達(dá)水平，抑制率最高達(dá)8 0 ．2 2 ％，提示可有效沉默B C 0 4 7 4 4 0 基因； ( 2 ) 沉默H 印G 億細(xì)胞中的B C 0 4 7 4 4 0 基因后，可以明顯抑制H 印G 2 的增殖，和我們前期研究結(jié)果一致；( 3 ) B C 0

5、 4 7 4 4 0 基因促進(jìn)H e p G 2 細(xì)胞的增殖的調(diào)節(jié)機(jī)制之一可通過N F ．1 ( B 信號(hào)途徑實(shí)現(xiàn)，通過增加N F ．1 c B活性促進(jìn)H e p G 2 細(xì)胞的增殖。 ( 4 ) 沉默B C 0 4 7 4 4 0 基因后基因芯片檢測(cè)的相關(guān)基因譜表達(dá)改變結(jié)果提示B C 0 4 7 4 4 0 基因在H 印G 2 細(xì)胞中參與多種生命活動(dòng)，P C R 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)提示B C 0 4 7 4 4 0 基因可能通過改變T 黜虹6