1、目的:
　　觀察當歸揮發(fā)油(Angelicanaphtha, AN)對血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)誘導的肥大心肌細胞CaN通路及T型鈣離子通道的影響,探討當歸揮發(fā)油抑制AngⅡ誘導心肌細胞肥大的作用及其機制。
　　方法:
　　選擇 H9c2心肌細胞株,將細胞濃度調(diào)整到1×106cells/mL,37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。用10-4 mg·L-1血管緊張素Ⅱ作用于心肌細胞24h成功建立

2、心肌細胞肥大模型。應用超臨界萃取裝置提取當歸揮發(fā)油。實驗分為5組:空白對照組;模型組;低劑量(5mg·L-1)組、中劑量(10mg·L-1)組、高劑量(20mg·L-1)組。MTT法檢測心肌細胞活力的改變;激光共聚焦顯微鏡檢測線粒體膜電位和細胞內(nèi)鈣離子濃度,用試劑盒檢測的活性及表達變化、用western blot檢測CaN蛋白、T型鈣離子通道相關基因蛋白Cav3.1(CACNA1G)、Cav3.2(CACNA1H)以及凋亡蛋白caspa

3、se-3、caspase-12的表達情況。
　　結(jié)果:
　　1.MTT法檢測心肌細胞存活率:血管緊張素Ⅱ造模后心肌細胞存活率明顯增加,與對照組比較,差異有顯著性(P<0.05)。與血管緊張素Ⅱ組相比,當歸揮發(fā)油干預組心肌細胞的細胞存活率均有所下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.激光共聚焦檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度:與空白組相比,模型組Ca2+平均熒光強度明顯增強,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與模型組比較,

4、當歸揮發(fā)油干預組Ca2+平均熒光強度明顯減弱,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3.激光共聚焦顯微鏡檢測線粒體膜電位,與空白組相比,模型組AngⅡ(濃度10-4mg·L-1)細胞體積增大,平均熒光強度明顯增強,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與模型組比較,當歸揮發(fā)油干預組細胞體積縮小,線粒體數(shù)目減少,熒光強度明顯減弱,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　4.流式細胞術檢測細胞周期,與空白組相比,模型組G2期細胞增

5、多,差異具有顯著性(P<0.05);與模型組相比,當歸揮發(fā)油干預組的G2期細胞有所減少,差異統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　5.Western Blot檢測CaN蛋白、Cav3.1(CACNA1G)、Cav3.2(CACNA1H)蛋白的表達情況:AngⅡ組與空白組比較,CaN、Cav3.1、Cav3.2表達增高,caspase-3和caspase-12凋亡相關蛋白表達增高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),與模型組比較,當歸揮