1、VEGF基因能特異性地促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和血管新生。在雌性動(dòng)物的的卵泡發(fā)育、卵母細(xì)胞的成熟、黃體的形成與功能的維持、早期胚胎植入、子宮蛻膜化及胎盤的形成等生理過程中，VEGF都起著十分重要的作用。因此進(jìn)一步了解成年綿羊母羊在妊娠不同時(shí)期生殖器官，包括卵巢上的卵泡、輸卵管及子宮內(nèi)膜上VEGF 基因的表達(dá)變化規(guī)律以及在高繁殖力的小尾寒羊和低繁殖力的東北細(xì)毛羊子宮內(nèi)膜中 VEGF 基因的表達(dá)差異。探討VEGF在綿羊母羊妊娠發(fā)育過程中的作用。初

2、步闡明VEGF基因?qū)d羊妊娠發(fā)育的影響與調(diào)控機(jī)制。不僅可為反芻動(dòng)物高效繁育調(diào)控與提高動(dòng)物繁殖潛力提供理論指導(dǎo)，同時(shí)也可為開發(fā)新的調(diào)控繁殖性能的疫苗或藥物奠定基礎(chǔ)。 本研究采用了反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法，分別從不同孕期的東北細(xì)毛羊和小尾寒羊的卵巢上的卵泡、輸卵管和子宮內(nèi)膜中提取總 RNA擴(kuò)增VEGF基因，通過T<,4>DNA連接酶將其直接連接于克隆質(zhì)粒載體pMD-19-T中，轉(zhuǎn)化至受體菌JM109中，通過質(zhì)粒提取

3、、PCR鑒定、序列測定，證明重組質(zhì)粒pMD-19-T-VEGF中含有VEGF基因，并以β-Actin作為內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)檢測了VEGF的mRNA在孕期綿羊卵巢上的卵泡、輸卵管和子宮內(nèi)膜中的表達(dá)情況，并對(duì)VEGF的部分cDNA片段進(jìn)行序列測定。以期闡明VEGF 基因在不同繁殖力的不同妊娠時(shí)期綿羊主要生殖器官中的作用，研究結(jié)果表明：綿羊妊娠前期、中期、后期子宮內(nèi)膜中 VEGFmRNA 均有強(qiáng)烈表達(dá)，隨著妊娠的持續(xù)，子宮內(nèi)膜的表達(dá)逐漸升高，且妊娠早

4、期、中期、晚期相比子宮內(nèi)膜中VEGFmRNA表達(dá)差異顯著(P<0.05)。而在輸卵管和卵巢上的卵泡的變化不明顯。綿羊在妊娠時(shí)期子宮內(nèi)膜上 VEGF 基因的表達(dá)水平明顯高于妊娠時(shí)卵巢上的卵泡和輸卵管的表達(dá)水平(P<0.05)，而輸卵管的表達(dá)水平又明顯高于卵巢上的卵泡的表達(dá)水平(P<0.05)。同時(shí)，VEGFmRNA在東北細(xì)毛羊與小尾寒羊妊娠同一時(shí)期的子宮內(nèi)膜、卵巢上的卵泡、輸卵管相比差異不顯著。測序結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)羊的部分核苷酸序列與人(81