漢坦病毒感染體外培養(yǎng)乳大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、漢坦病毒(Hantavirus,HTVs)屬布尼亞病毒科(Bunyaviridae)漢坦病毒屬(Genushantavirus),是引起腎綜合征出血熱(HFRS)和漢坦病毒肺綜合征(HPS)的致病病毒。漢灘病毒(HTNV)、漢城病毒(SEOV)、多布拉戈一貝爾格萊德病毒(DOBV)和普馬拉病毒(PUUV)分別引起重、中、輕程度不同的HFRS。
  已證實(shí)HTVs在許多實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)呈泛嗜性感染,且乳鼠腦對HTVs高度易感,易致致死性

2、腦炎,這也是HTVs致死性的主要原因之一。HTVs侵入機(jī)體首先在血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖,后釋放入血,研究證實(shí)病毒可經(jīng)血腦屏障進(jìn)入腦組織。星形膠質(zhì)細(xì)胞終足包繞著毛細(xì)血管,是血腦屏障的重要組成成分。但目前對于HTVs感染星形膠質(zhì)細(xì)胞尚鮮見報(bào)道,為此,我們首先建立了乳大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系,分別用HTNV76-118和SEOVL99毒株感染細(xì)胞,為進(jìn)一步研究HTVs的致病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
  我們通過應(yīng)用出生24h內(nèi)的Spr

3、ague-Dawley乳鼠,建立乳大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系;分別用HTNV76-118株和SEOVL99株病毒感染乳大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞,于感染后1d,2d,3d,4d,5d,6d和7d收集細(xì)胞,免疫熒光染色、Western印跡和RT-PCR檢測病毒感染細(xì)胞病毒NP和S基因片段的變化;用Hoechst33342染色、Annexin-V、Western印跡和RT-PCR檢測病毒感染和星形膠質(zhì)細(xì)胞間相互作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn):漢坦

4、病毒感染星形膠質(zhì)細(xì)胞1d即可在細(xì)胞中檢測到病毒抗原和少量病毒S片段RNA擴(kuò)增產(chǎn)物,在病毒感染5d、6d和7d,病毒NP表達(dá)量和病毒S片段RNA擴(kuò)增產(chǎn)物量較病毒感染后1d顯著增多,隨著感染時(shí)間的推移細(xì)胞陽性率逐漸增加(P﹤0.01)。且漢坦病毒感染后,未見凋亡細(xì)胞,Hsp70輕微增加趨勢,GFAP呈增加趨勢。本實(shí)驗(yàn)成功地建立了乳大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,并證實(shí)其可作為HTNV和SEOV感染的靶細(xì)胞。隨著感染時(shí)間的推移病毒感染細(xì)

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