1、目的:通過探討不同劑量NaF誘導體外培養(yǎng)大鼠星形膠質細胞凋亡、細胞周期和5’-NT、SDH、ACP活性變化機制，為進一步研究氟的中樞毒性機制提供實驗依據(jù)。 方法:(1)通過體外分離純化培養(yǎng)星形膠質細胞的方法，獲得純度達98％以上的星形膠質細胞(特異性抗GFAP免疫化學鑒定)；(2)MTT法檢測各代細胞對NaF毒性的敏感性；(3)顯微鏡觀察法、MTT法、FCM確定NaF染毒劑量范圍；(4)采用倒置顯微鏡觀察和FCM檢測的方法，觀察

2、不同時間點(12h、24h、48h、72h)不同濃度NaF誘導的細胞凋亡，F(xiàn)CM檢測細胞周期構成比；(5)紫外分光光度計檢測SDH、5’-NT、ACP活性。 結果:(1)星形膠質細胞傳代數(shù)超過8代后對毒物的敏感性明顯下降，故宜采用第8代以內(nèi)細胞作NaF毒理學研究；(2)NaF抑制星形膠質細胞生長和誘導細胞凋亡：影響細胞周期構成比呈時效(P<0.01)和量效關系(P<0.05)：(3)倒置顯微鏡下觀察，2mmol/L，及以上劑量處

3、理細胞12h后，細胞逐漸由貼壁而脫落，呈明顯的劑量和時間依賴性；吉姆．瑞氏染色后，可見細胞膜連接中斷，胞漿空泡，細胞膜皺縮，出芽現(xiàn)象，核膜不規(guī)則，核的染色質呈現(xiàn)固縮，并在核膜上結成均質的致密小塊，形成典型的結節(jié)狀、串珠狀或半月形廓，可見核小體，細胞呈現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)特征，且凋亡細胞隨劑量增加和時間延長而增多；(4)FCM分析細胞周期顯示：各時間點處理細胞隨染毒劑量加大和時間延長，subGl細胞逐漸增多(時效P<0.01；量效P<0.05

4、)；1～5mmol/LNaF劑量范圍內(nèi)12h時間點細胞隨劑量增加由GJM期阻滯(P<0.01)向S期阻滯(P<0.01)轉變；作用時間超過12h，1～2mmol/L范圍內(nèi)也可誘導細胞由G<,2>/M阻滯(P<0.01)向S期阻滯(P<0.001)轉變，且呈時間依賴性；增加劑量，則主要為subG<,1>細胞；(5)NaF抑制SDH(P<0.001)、ACP(P<0.001)活性，對5’-NT活性影響不明顯(P>0.1)；5’-NT、SDH

5、、ACP活性與subGl DNA相對含量呈顯著負相關(SDH：r=-0.84148 P<0.02；ACP：r=-0.90416 P<0.01)。 結論: (1)采用大鼠大腦皮質星形膠質細胞探討NaF的毒性機制，宜選擇傳第8代以內(nèi)細胞：本實驗首次以體外培養(yǎng)大鼠大腦皮質星形膠質細胞為研究模型，觀察NaF對星形膠質細胞的毒性作用； (2)NaF誘導星形膠質細胞凋亡的效應與劑量和時間有關； (3)NaF可以抑制星