1、豬瘟 (Classic Swine Fever,CSF) 是由豬瘟病毒 (Classic Swine Fever virus,CSFV) 引起的一種豬的高度接觸性傳染疾病,被世界動物衛(wèi)生組織 (Office International des Epizooties,OIE) 列為A類傳染病之一.目前,免疫預防接種仍然是控制和根除CSF的主要手段,因此研制和正確使用安全有效疫苗仍是CSF綜合防治中的中心環(huán)節(jié).使用傳統(tǒng)疫苗例如C-株免疫的豬

2、群,在流行病學調查和CSF防制工作中,不能用血清學方法來區(qū)分自然感染豬群和免疫接種豬群,因此,迫切需要像DNA疫苗一類的標記疫苗來對CSF進行有效合理的控制. 在前面的研究中,對基于RNA復制子表達載體的CSF DNA疫苗pSFV1CS-E2的免疫效果進行了研究,發(fā)現免疫豬后能產生CSFV的特異性的中和抗體并能抵抗強毒的攻擊.為了進一步明確pSFV1CS-E2的保護作用,用較低劑量的pSFV1CS-E2、較少免疫次數免疫豬,再用CSFV

3、石門株進行攻毒,其間觀察臨床癥狀,剖殺后觀察病理解剖學變化,并取各器官用4﹪多聚甲醛固定,常規(guī)制作石蠟切片,蘇木精-伊紅 (hematoxylin and eosin,HE) 染色,進行組織病理學觀察.制作簡易的手工石蠟組織芯片,用免疫組織化學 (immunohistochemistry,IHC)、原位雜交組織化學 (in situ hybridization histochemistry,ISHH) 及原位逆轉錄聚合酶鏈式反應 (in

4、 situ reversetranscription polymerase chain reaction,ISRT-PCR) 等分子病理學方法檢測各器官中CSFV的分布及載量,同時對三種檢測方法的敏感性進行了比較，另外還建立了一種對石蠟包埋標本中的CSFVRNA進行擴增的套式RF-PCR方法,用此方法對CSFV在各個器官中的分布進行了符合檢測. 臨床、病理解剖及組織病理學觀察發(fā)現免疫攻毒組豬只的臨床表現正常、病理學變化較輕或者無

5、變化,大部分豬只的免疫器官中淋巴細胞和淋巴濾泡的數量增加,生發(fā)中心體積增大,漿細胞數量增加;脾臟和淋巴結中的胸腺依賴區(qū)的淋巴細胞的增多;空質粒攻毒對照組則出現典型的病癥甚至死亡. 分子病理學檢測結果表明，免疫攻毒組與空質粒攻毒對照組相比CSFV抗原和基因檢出率低，分布的范圍較小,三種不同的檢測方法的敏感性存在差異,以ISRT-PCR方法最敏感,其次是ISHH,最后是IHC.套式RT-PCR技術檢測石蠟包埋組織中的病毒RNA，檢測

6、結果與其它檢測方法相符合,免疫攻毒組的檢出率明顯的低于攻毒對照組. 研究結果表明，pSFV1CS-E2可以提高機體的免疫反應,抑制CSFV在豬體內增殖,保護CSFV對組織器官免受病理性損傷,對CSFV強毒攻擊有一定的抵抗作用.ISRT-PCR,ISHH,IHC等分子病理學方法在敏感性上雖然存在一定差異,但均可以作為評價CSF疫苗免疫效果和研究CSFV致病機制的有效手段.建立的檢測石蠟包埋組織中CSFV RNA的套式RT-PCR方