1、目的：探討急性白血病細胞免疫治療的新途徑。將樹突狀細胞(dendritic cells，DC)和細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine induced killer cells，CIK)一起孵育，觀察共培養(yǎng)物DC細胞與CIK細胞的增殖能力、免疫膜標變化、分泌細胞因子水平以及抗急性白血病細胞的效應。同時與CIK細胞單獨培養(yǎng)的生物學活性和抗白血病作用相比較，為白血病治療尋找一種更理想的免疫活性細胞。
　　 方法：CIK細胞的體外培

2、養(yǎng)。采取正常健康人的外周血，經肝素抗凝后，用H-F(Hypaque-Ficoll)淋巴細胞分離液相對密度為1.077±0.001，分離獲得單個核細胞(mononuclearn cells，MNC)。然后用RPMI 1640培養(yǎng)液洗滌3次，調整細胞濃度至4×106/ml，進行貼壁細胞培養(yǎng)，收集懸浮的細胞，用含10％小牛血清(fetal calf serum，F(xiàn)BS)RPMI 1640液將細胞濃度調整至1×106/ml，經37℃、5％CO2

3、培養(yǎng)，分別于第0天、第1天加入不同的細胞因子，以后每隔3天更換新的培養(yǎng)液。3天后更換培養(yǎng)液的同時補充加入重組人白細胞介素-2(rh-interleukin-2，rhIL-2)。DC細胞的體外培養(yǎng)方法是通過將健康人外周血單個核細胞，用RPMI1640培養(yǎng)液調整細胞濃度為4×106/ml，培養(yǎng)1到2小時，吸棄培養(yǎng)基及懸浮的細胞，在培養(yǎng)瓶中加入新鮮的RPMI 1640培養(yǎng)液，反復吹吸使貼壁細胞懸浮。收集懸浮貼壁細胞，離心洗滌，進行細胞計數，調

4、整細胞濃度為1×106/ml。然后用含有10％的FBS的RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)液中同時加入重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(rh-granulocytemacroph-age.colony-stimulating.factor,rhGM-CSF)550 U/ml、重組人白細胞介素-4(rh-interleukin-4，rhIL-4)500 U/ml。按照常規(guī)培養(yǎng)，隔日半量換液，并補加細胞因子。于培養(yǎng)72小時前再加入重組人腫瘤

5、壞死因子-a(rh-tumor necrosis factor-a,rhTNF-a)50 U/ml，誘導DC細胞的成熟。將獲培養(yǎng)第9天的DC細胞及CIK細胞經臺盼藍排斥法活細胞計數后，用含有10％FBS的RPMI 1640液調整細胞濃度，調整DC細胞濃度為1×106/md，CIK細胞濃度為5×106/ml，按照DC細胞與CIK細胞之比為1:5的比例將兩者混合培養(yǎng)，培養(yǎng)至第3天與第6天收集共培養(yǎng)的細胞，進行生物學活性測定。
　　

6、結果：研究結果表明，DC細胞與CIK細胞共培養(yǎng)后，其細胞增殖能力、細胞毒活性、免疫表型的表達、細胞因子分泌水平與單獨CIK細胞相比有明顯或顯著性差異。
　　 結論：與DC細胞共培養(yǎng)可以提高CIK細胞的增殖速度；DC細胞可增強CIK細胞的殺傷活性，在同一效靶比對急性白血病細胞的殺傷活性各型之間無明顯差異，隨著效靶比的增高對急性白血病細胞的殺傷活性增強；共培養(yǎng)細胞CD3+CD8+及CD3+CD56+雙陽性細胞比值明顯高于同條件下單獨