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文檔簡介
1、目的:
全基因組關(guān)聯(lián)分析鼻咽癌與慢性鼻咽炎組織中長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表達(dá)水平的改變,探討lncRNA的表達(dá)改變在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其潛在的分子機制。
方法:
收集42例鼻咽組織標(biāo)本,包括21例鼻咽癌組織和21例慢性鼻咽炎組織。首先進(jìn)行基因芯片雜交實驗:選擇其中6例鼻咽癌組織和6例慢性鼻咽炎組織作為基因芯片雜交實驗的材料,分離提取總RNA并檢測其質(zhì)量,
2、將RNA制備成雙鏈cDNA,用單色熒光標(biāo)記雙鏈cDNA,與8×60K芯片雜交,用Agilent Scanner G2505C掃描儀掃描,將掃描圖像輸入Agilent Feature Extraction(version11.0.1.1)軟件和Agilent GeneSpring GX(version11.5.1)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析并輸出芯片雜交結(jié)果,得到差異表達(dá)的lncRNA和mRNA。然后利用GO(Gene Ontology,基因本體論
3、)和Pathway分析進(jìn)一步研究。最后,進(jìn)行實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR),對部分基因芯片雜交實驗結(jié)果進(jìn)行檢測并驗證其可靠性。
結(jié)果:
在鼻咽癌與慢性鼻咽炎組織中,共有856條lncRNAs差異表達(dá)(2倍以上變化且P<0.05),其中425條lncRNAs表達(dá)上調(diào),431條lncRN
4、As表達(dá)下調(diào);共有767條mRNAs差異表達(dá),其中426條mRNAs表達(dá)上調(diào),341條mRNAs表達(dá)下調(diào)。聚類分析法將所有l(wèi)ncRNA分成3類:基因間lncRNA,HOX基因簇,增強子型lncRNA。GO分析法將mRNA分成3類:生物學(xué)過程類、細(xì)胞組分類、分子功能類。Pathway分析顯示差異表達(dá)mRNA共參與28條信號通路,其中表達(dá)上調(diào)的信號通路18條,下調(diào)的13條,有3條信號通路(Cytokine-cytokine receptor
5、 interaction,Chemokine signaling pathway,Neuroactive ligand-receptor interaction)同時參與了表達(dá)上調(diào)和下調(diào)。上調(diào)mRNA富集度較高的10條信號通路中,細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用(cytokine-cytokine receptor interaction)信號通路的富集度最高,為5.428282。第一次CNC基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)(coding-non-codi
6、ng gene co-expression network)分析結(jié)果顯示46個差異表達(dá)的lncRNAs與3個參與JAK-STAT信號通路的mRNAs相互關(guān)聯(lián)。qRT-PCR實驗證明11個lncRNAs和8個mRNAs的表達(dá)水平與基因芯片結(jié)果一致。第二次CNC構(gòu)圖結(jié)果表明23個差異表達(dá)的mRNAs與3個經(jīng)驗證的lncRNAs之間相互作用。
結(jié)論:
與慢性鼻咽炎組織相比,鼻咽癌組織中l(wèi)ncRNA的表達(dá)水平明顯改變,表明差
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