1、目的： 探討粒/巨細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)分泌細(xì)胞聯(lián)合異體腫瘤細(xì)胞疫苗治療晚期實(shí)體瘤患者的安全可行性和有效性以及對(duì)機(jī)體免疫狀況的影響。 方法： 患者：選擇我院2007年1月至2008年5月病理診斷明確的IV期癌癥患者共60例，其中男性38例，女性22例，中位年齡47歲(25歲－84歲)，Kps評(píng)分：60-80。其中包括，惡性黑色素瘤患者11例，卵巢癌患者10例，腎癌患者15例，胃癌/結(jié)直腸癌患者14例，乳

2、腺癌患者10例。接受腫瘤疫苗治療前一個(gè)月未接受放療和/或化療，在患者及家屬知情同意的情況下進(jìn)行治療，并簽署知情同意書(shū)。根據(jù)患者的病理類型在接受治療前培養(yǎng)相應(yīng)腫瘤細(xì)胞系使腫瘤細(xì)胞數(shù)量>6×107，以滿足治療需要，經(jīng)滅活劑滅活使腫瘤細(xì)胞停止分裂增值，液氮保存。以GM-CSF平穩(wěn)表達(dá)的A549細(xì)胞為分泌細(xì)胞(由北京博沃德生物技術(shù)有限公司提供)，GM-CSF的分泌量大于1ug/106細(xì)胞/24小時(shí)。每次注射前復(fù)蘇異體腫瘤細(xì)胞，并進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)確保

3、細(xì)胞未被污染。將這兩種細(xì)胞混合后即刻進(jìn)行注射，每次皮下注射異體腫瘤細(xì)胞和GM-CSF分泌細(xì)胞混合物1ml，1次/周，共6次。注射部位為取雙上臂內(nèi)測(cè)中上1/3處，雙大腿內(nèi)側(cè)中上1/3處，輪流注射。在第1，5次注射同時(shí)，在前臂前1/3處內(nèi)側(cè)皮膚進(jìn)行異體腫瘤細(xì)胞DTH接種。每次注射都要按照《生物治療觀察表》要求項(xiàng)目詳細(xì)記錄DTH反應(yīng)情況、注射部位及全身反應(yīng)情況。在第一次治療前和最后一次治療后取外周血樣10ml應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)：CD4+Th細(xì)

4、胞、CD8+CTL細(xì)胞、CD4+CD25+CD127-(Treg)細(xì)胞、CD3-CD16+56+CD45+(NK)細(xì)胞比例變化情況。應(yīng)用ELISA檢測(cè)血清細(xì)胞因子IFN-γ，IL-4，TGF-β1變化情況。完成治療1個(gè)月后進(jìn)行影像學(xué)檢查，進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。 結(jié)果: 安全性：所有患者均完成治療，無(wú)因不良反應(yīng)而停止治療的患者。治療后KPS評(píng)分無(wú)明顯變化(P>0.05)。治療過(guò)程中7/60例患者出現(xiàn)發(fā)熱，都在39度以下，1例出現(xiàn)頭

5、痛頭暈，未治療自行好轉(zhuǎn)。48/60例患者出現(xiàn)紅腫疼痛硬結(jié)，40/60例瘙癢，2/60例出現(xiàn)水泡。未發(fā)現(xiàn)疫苗相關(guān)的自身免疫反應(yīng)，未發(fā)現(xiàn)其他 治療結(jié)束一個(gè)月后評(píng)價(jià)，無(wú)完全緩解(CR)和部分緩解病例(PR)，1例死亡，4例至少有一處腫瘤縮小但未達(dá)到部分緩解(MR)；16例進(jìn)展，胃/結(jié)直腸癌10例，惡性黑色素瘤、乳腺癌各2例，卵巢癌、腎癌各1例：其中包括原有肝轉(zhuǎn)移10例，腦轉(zhuǎn)移2例，肺轉(zhuǎn)移1例患者，其他部位轉(zhuǎn)移3例；40例穩(wěn)定，腎癌12

6、例，惡性黑色素瘤、卵巢癌各9例，乳腺癌8例，胃/結(jié)直腸癌2例。隨訪至2008年6月30日因疾病進(jìn)展(PD)死亡8例，其中6例肝轉(zhuǎn)移，1例腦轉(zhuǎn)移。治療后有5例病情穩(wěn)定(SD)超過(guò)9周。4例生存超過(guò)1年，其中惡性黑色素瘤2例，胃/結(jié)直腸癌2例。中位總生存時(shí)間5.5個(gè)月。 因?yàn)橥暾哪[瘤細(xì)胞是多價(jià)免疫原性，采用國(guó)際通用的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以DTH接種部位的紅腫硬結(jié)最大直徑作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。第1次接種12M0例DTH陽(yáng)性，第5次接種44/60例DTH

7、陽(yáng)性，其中MR患者2例，16例進(jìn)展患者中有3例DTH陽(yáng)性；40例穩(wěn)定患者中有34例DTH陽(yáng)性。穩(wěn)定和進(jìn)展患者的局部反應(yīng)程度和DTH反應(yīng)程度都有明顯差異(Z=243 P=0.000，Z=3.499 p=0.000)。試驗(yàn)還觀察到穩(wěn)定和進(jìn)展患者的DTH陽(yáng)性率有明顯差異(P<0.005)，且DTH反應(yīng)程度也有明顯差異(P<0.001)，試驗(yàn)表明穩(wěn)定患者的DTH反應(yīng)程度及陽(yáng)性率明顯強(qiáng)于進(jìn)展患者，并且DTH反應(yīng)程度和局部反應(yīng)程度線性相關(guān)(R2=0

8、.594，P<0.001)。各病種DTH陽(yáng)性反應(yīng)情況，惡性黑色素瘤8/11例陽(yáng)性、卵巢癌7/10例陽(yáng)性、腎癌12/15例陽(yáng)性、乳腺癌7/10、胃結(jié)直腸癌7/14例陽(yáng)性。局部反應(yīng)程度和臨床療效之間也有一致性。2例局部反應(yīng)4級(jí)的胃/結(jié)直腸癌患者，病情有所好轉(zhuǎn)。 治療后TGF-β1在惡性黑色素瘤和腎癌明顯降低(P<0.05)。CD8+T細(xì)胞在治療后的惡性黑色素瘤、卵巢癌、腎癌明顯升高(P<0.05)。Treg細(xì)胞在治療后的所有患者都明