1、目的:流行病學資料顯示維生素D缺乏能促進動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展,從而增加心血管事件的風險。維生素D介導一系列生活學效應在動脈粥樣硬化過程中可能起著很重要的保護作用,但維生素D抗動脈粥樣硬化的具體機制尚不清楚。維生素D受體(VDR)在調控基因表達中需與視黃醇X受體(RXR)形成異源二聚體,共同調節(jié)多種基因的表達。我們前期已經(jīng)發(fā)現(xiàn)RXR可能是機體抗動脈粥樣硬化的重要內源性保護因素。因此本研究對VDR激動劑1,25(OH)2D3在高糖誘導人

2、臍靜脈血管內皮細胞(HUVECs)產(chǎn)生的氧化應激和細胞凋亡過程中的作用和機制,以及與RXR信號通路之間的相互關系進行探討。
　　方法:本研究中采用原代培養(yǎng)的HUVECs,通過流式細胞學方法和熒光顯微鏡檢測HUVECs凋亡率和細胞內的活性氧離子(ROS)水平,分別應用實時熒光定量PCR和免疫印跡雜交的方法檢測煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亞基p22phox和gp91phox的表達水平,用免疫印跡雜交方法檢測活化的PKC

3、、caspase-3的蛋白表達水平。利用干擾RNA(SiRNA)技術分別沉默VDR或RXRα基因,研究VDR信號通路與RXR信號通路之間的相互作用關系。
　　結果:(1)高糖處理后HUVEC凋亡百分率和caspase-3蛋白表達顯著增加,細胞ROS水平顯著上升。高糖處理顯著上調NADPH氧化酶p22phox和gp91phox亞基的mRNA和蛋白表達水平。(2)1,25(OH)2D3和RXR激動劑9-cis-RA均能抑制高糖誘導的c

4、aspase-3蛋白表達、內皮細胞凋亡、ROS生成、PKC的活化,以及NADPH氧化酶p22phox和gp91phox亞基mRNA和蛋白水平的表達,并且兩者聯(lián)合干預具有協(xié)同抑制效應。(3)預先轉染VDRsiRNA,1,25(OH)2D3抑制高糖誘導下caspase-3蛋白表達、內皮細胞凋亡、ROS生成、PKC的活化、p22phox和gp91phox亞基表達的作用明顯減弱,而預先轉染RXRαsiRNA,1,25(OH)2D3抑制作用無明顯

5、影響。(4)然而當預先轉染VDRsiRNA再用9-cis-RA干預,9-cis-RA抑制氧化應激和內皮細胞凋亡的作用減弱。
　　結論:(1)VDR激動劑1,25(OH)2D3和RXR激動劑9-cis-RA均能抑制高糖誘導人血管內皮細胞的凋亡和氧化應激反應,并且兩者聯(lián)合干預具有協(xié)同抑制效應。(2)1,25(OH)2D3可能通過VDR—PKC—NADPH氧化酶—ROS信號通路抑制高糖誘導的內皮細胞氧化應激和細胞凋亡。(3)9-cis-