1、目的：
　　作為一種由多種原因引起的以慢性高血糖為特征的終身代謝性疾病，糖尿病已經(jīng)成為21世紀(jì)人類所面臨的最具挑戰(zhàn)性的疾病之一。長期持續(xù)的血糖增高會導(dǎo)致大血管、微血管損害而導(dǎo)致心、腦、腎、周圍神經(jīng)、眼睛、足等發(fā)生病變。據(jù)估計，糖尿病患者中75%的死亡率都是由于心血管疾病所引起的。越來越多的研究表明炎癥和氧化應(yīng)激在糖尿病血管系統(tǒng)并發(fā)癥的形成和發(fā)展的起著重要作用。α-硫辛酸（LA），是一種線粒體中的輔酶，因有很強(qiáng)的還原性，被稱為“萬能

2、抗氧化劑”。本課題通過高濃度葡萄糖誘導(dǎo)人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷，建立糖尿病細(xì)胞模型，用不同劑量的α-硫辛酸進(jìn)行干預(yù)處理，探討α-硫辛酸對高糖誘導(dǎo)的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激作用的影響并揭示其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　體外建立高糖（30mM）誘導(dǎo)的人主動脈細(xì)胞（HAECs）損傷模型，分別加入不同濃度硫辛酸（50，100，200μM）。用還原性谷胱甘肽（GSH）測試盒檢測細(xì)胞中GSH的含量。采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測硫辛酸對高糖

3、誘導(dǎo)的HAECs內(nèi)活性氧（ROS）產(chǎn)生量的影響。利用蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）方法檢測HAECs中NADPH氧化酶-4(Nox4)、p22phox、Caspase-3、Bcl-2蛋白的表達(dá)水平，細(xì)胞色素C的線粒體釋放以及Nuclear Factor-κB(NF-κB)信號通路的激活情況。采用實(shí)時熒光測定PCR(Real-time RT-PCR)檢測Nox4、p22phox mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　

4、1.與空白組相比較，高糖誘導(dǎo)后HAECs中GSH含量明顯降低(p<0.01)，硫辛酸給予后可以劑量依賴性的增加人細(xì)胞中GSH的表達(dá)量(p<0.01)；2.與空白組相比較，高糖增加HAECs中ROS的過量產(chǎn)生(p<0.01)、增加Nox4和p22phox mRNA和蛋白的過量表達(dá)（p<0.01，p<0.01），加入不同濃度的硫辛酸后高糖誘導(dǎo)人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中活性氧 ROS的產(chǎn)生量明顯減少（p<0.05），且硫辛酸抑制高糖誘導(dǎo)的Nox4和p

5、22phox mRNA和蛋白的過量表達(dá)（p<0.01,p<0.01）；3.與空白組相比較，高糖顯著增加I-κB的降解，促進(jìn)P65的核轉(zhuǎn)位，從而增加NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性，而硫辛酸可以抑制高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞中 I-κB的降解，以及 P65的核轉(zhuǎn)位，進(jìn)而抑制NF-κB信號通路的激活（p<0.05）；4.高糖誘導(dǎo)后，凋亡相關(guān)蛋白Caspcase-3表達(dá)上調(diào)而抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)明顯下降（p<0.01），硫辛酸干預(yù)后使抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)呈

6、濃度依賴性增加（p<0.01），同時硫辛酸還能下調(diào)凋亡蛋白Caspcase-3的表達(dá)（p<0.01）；5.與空白組相比較，高糖使人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中細(xì)胞色素 C的線粒體釋放量增加，而加入硫辛酸后減少高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞色素 C的線粒體釋放（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　硫辛酸可以抑制高糖誘導(dǎo)的HAECs中ROS過量產(chǎn)生，抑制還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）家族中Nox4、p22phox亞基的mRNA和蛋白的過量表達(dá)；