1、昆蟲病原線蟲共生菌是共生于昆蟲病原線蟲(entomopathogeic nematodes，EPNs)腸道內(nèi)的一類細(xì)菌，在.EPNs中對昆蟲的致病力起關(guān)鍵性作用，與線蟲之間的關(guān)系可以概括為：線蟲攜帶共生菌進(jìn)入寄主昆蟲體內(nèi)，并釋放到昆蟲的血腔中；共生菌在昆蟲血腔內(nèi)繁殖，產(chǎn)生殺蟲活性極高的蛋白毒素，使昆蟲患敗血癥，一般在48h內(nèi)死亡。由于這類殺蟲毒素蛋白具有高效、殺蟲譜廣和殺蟲迅速等諸多優(yōu)點(diǎn)，從共生菌中克隆殺蟲毒性基因用于開發(fā)新型生物源殺蟲

2、物質(zhì)，以延緩害蟲對目前使用的殺蟲物質(zhì)產(chǎn)生的抗性，已成為當(dāng)今的研究熱點(diǎn)。昆蟲病原線蟲共生菌已成為一類有待開發(fā)的生物資源，基于此，昆蟲病原線蟲共生菌的分類鑒定是開展相關(guān)研究的基礎(chǔ)。 分子鑒定：昆蟲病原線蟲共生菌YL001是西北農(nóng)林科技大學(xué)無公害農(nóng)藥研究中心分離得到的一株有較強(qiáng)殺蟲活性的共生菌，其分子鑒定是根據(jù)目前已知16s tDNA基因，設(shè)計(jì)引物對P<,1>P<,2>，以YL001菌株的總DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物大小為568

3、bp， GenBank的接收號為EF206655，此序列與GenBank登錄號為XNl6RNA0的序列相似性達(dá)99.5％。構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，顯示與.Xenorhabdus nematophilus的親緣關(guān)系最近。昆蟲病原線蟲共生菌YL001與GenBank中現(xiàn)有的昆蟲病原線蟲共生菌同源序列進(jìn)行比對，與Xenorhabdus nematophilus的相似形高達(dá)99.5％，遺傳距離為0.5，進(jìn)一步證實(shí)了該菌株就是.Xenorhabdus n

4、ematophilus。 殺蟲毒性基因的克?。阂訷L001為材料，根據(jù)已報(bào)道的殺蟲毒素基因-菌毛蛋白亞基序列，設(shè)計(jì)引物對P<,3>P<,4>，以YL001菌株的總DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得特異性片斷，并將此片斷克隆到T-easy載體上，獲得了重組子pGEM-PSYL001，序列測定和分析結(jié)果表明，PSYL001閱讀框全長537bp，編碼179個(gè)氨基酸，預(yù)測分子質(zhì)量和等電點(diǎn)分別為18.9ku和6.94，GenBank的接收號