1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文表達載體介導(dǎo)的Notch2基因沉默抑制人骨肉瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的實驗研究姓名：陳劍鋒申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：骨科指導(dǎo)教師：陳安民201104華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文3一般來說Notch2蛋白的陽性表達主要體現(xiàn)在腫瘤細胞的細胞膜或細質(zhì)，顏色一般是呈棕黃色，散在性的顆粒分布。82例骨肉瘤中有64例呈陽性表達，陽性率78.1%(6482)，對照組為17.6%(634)，這兩個組之間的差異還是具有和明顯

2、的(P0.05)。(2)Notch2在MG63中的表達情況與骨肉瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力是有很強的關(guān)聯(lián)性Notch2mRNA和蛋白在MG63中的表達結(jié)果顯示:在MG63人骨肉瘤細胞株細胞中與對照組比較，Notch2mRNA和蛋白表達水平分別0.860.09vs0.470.050.760.04vs0.220.08，具有顯著性差異(p0.05)。(3)Notch2在逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的小RNA干擾特異性沉默MG63細胞系中的表達情況Notch2在逆轉(zhuǎn)錄

3、病毒介導(dǎo)的小RNA干擾特異性沉默MG63細胞系中的表達相對于而言對照組而言是十分明顯的，其抑制效率71%(p0.05)，但是作為對照組的MG63Notch2RNAi的表達較MG63細胞系試驗中沒有明顯的改變，這個結(jié)果提示本研究中Notch2的表達是可以通過逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的小RNA干擾來有效沉默MG63其量的表達來實現(xiàn)的。通過體外實驗證實Notch2的表達可以影響骨肉瘤細胞的侵襲能力MG63Notch2RNAi細胞遷移顯下降，24小時劃痕

4、愈合率分別為52%vs75%，差異具有義(P0.05)。我們在實驗中通過Transwell侵襲小室測定法來檢測出MG63Notch2RNAi細胞在其干預(yù)后運動能力，結(jié)果也是顯示MG63Notch2RNAi細胞運動侵襲能力是下降很明顯的，計數(shù)經(jīng)過約24小時細胞培養(yǎng)后穿過Transwell膜的每低倍視野細胞數(shù)情況計數(shù)結(jié)果分別為32.675.3，顯示其結(jié)果還是具有較強的差異性(P0.05)。同時用MTT法來測定MG63Notch2RNAi與其