1、目的:本研究選擇RASSF1A作為研究目標，探討不同濃度的甲基化轉移酶抑制劑5-Aza-CdR(5-Aza-2’-deoxycytidine，5-氮雜-2’脫氧胞苷)干預骨肉瘤細胞系MG63后對其RASSF1A抑癌基因mRNA和蛋白表達及細胞增殖的影響。
　　 研究方法:
　　 (1)細胞增殖情況的檢測:培養(yǎng)骨肉瘤MG63細胞，2-3天傳代一次。取生長良好的細胞，分別用不同濃度劑量（0、5、10、50μmol/L）的5-

2、Aza-CdR處理，處理不同時間(24h、48h、72h、96h)后，MTT法檢測各組細胞的增殖情況。
　　 (2)不同濃度5-Aza-CdR處理MG63細胞系后RASSF1A基因mRNA表達變化情況:培養(yǎng)骨肉瘤MG63細胞，并提取細胞總RNA，采用RT-PCR法擴增經(jīng)不同濃度劑量（0、5、10、50μmol/L）5-Aza-CdR處理MG63細胞系72h后的細胞RASSF1A基因mRNA轉錄水平。
　　 (3)不同濃度

3、5-Aza-CdR處理MG63細胞系后RASSF1a蛋白的表達變化情況:細胞MG63分別用不同濃度劑量（0、5、10、50μmol/L）的5-Aza-CdR處理72h后，經(jīng)0.2％胰酶處理，離心收集細胞，經(jīng)western-blot檢測MG63細胞系RASSF1a蛋白的表達水平。
　　 結果:
　　 (1)細胞增殖的變化:骨肉瘤細胞MG63經(jīng)0-50μmol/L5-Aza-CdR誘導96h后，MG63細胞增殖減少，細胞生長

4、速度明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 (2)RASSF1A基因表達的變化:經(jīng)0-50μmol/L5-Aza-CdR誘導72h后骨肉瘤細胞MG63的RASSF1A基因表達經(jīng)RT-PCR及WB檢測顯著上調，與實驗對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 (3)RASSF1A基因表達的抑癌作用:研究中我們發(fā)現(xiàn)，5-Aza-CdR處理MG63細胞系后，細胞增殖速度明顯下降，同時RASSF1A基因的轉