1、油菜是世界第三大油料作物，我國油菜籽年產(chǎn)量在1100-1200萬t之間，是我國第一大食用植物油源，占食用植物油消費總量的35％，并在生物柴油等再生性能源發(fā)展戰(zhàn)略中具有重要地位，其中甘藍(lán)型油菜占90％。油菜籽榨油后產(chǎn)生55％左右的菜籽餅粕，菜籽粕中含40％左右蛋白質(zhì)。菜籽蛋白富含含硫氨基酸，其營養(yǎng)價值、消化率等高于大豆蛋白。但因菜籽餅粕中存在硫代葡萄糖苷(簡稱硫甙或硫苷)降解產(chǎn)物等有毒物質(zhì)，限制了菜籽蛋白利用。此外，已有研究結(jié)果表明甘藍(lán)型

2、油菜吲哚硫苷含量與餅粕質(zhì)量有密切關(guān)系。本文通過研究油菜葉片與種子硫苷檢測技術(shù)及組分、含量的相關(guān)性，建立了高效液相色譜法和高效毛細(xì)管電泳法測定油菜葉片和種子硫苷總量和分量的技術(shù)方法，首次系統(tǒng)研究分析了甘藍(lán)型油菜籽不同硫苷總含量水平下各硫苷成分組成、含量的變化規(guī)律及不同生育時期葉片硫苷總量和分量的變化規(guī)律，并初步探明了甘藍(lán)型油菜吲哚硫苷降解產(chǎn)物對 S<,180>移植性腫瘤抑制效應(yīng)。主要結(jié)果如下： 1.建立油菜葉片硫苷組分與含量測定方

3、法研究油菜葉片樣品干燥前處理方法、硫苷提取和分離檢測技術(shù)。對前處理方法，HPLC 色譜條件，離子交換柱，葉片硫苷提取技術(shù)，純化、脫硫酸根等實驗方法和技術(shù)參數(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)研究與優(yōu)化，建立了油菜葉片與組分的HPLC測定方法，為油菜葉片中硫苷檢測提供了技術(shù)手段支持。 2.研究油菜籽硫苷組分與含量HPCE測定方法研究建立了利用膠束電動高效毛細(xì)管電泳測定油菜籽中完整硫苷組分與含量檢測技術(shù)。對利用Dowex50×8(H<'+>)柱和QMA進(jìn)行

4、快速純化的實驗方法和技術(shù)參數(shù)進(jìn)行了比較和評價，探明了表面活性劑濃度、種類，緩沖液濃度，緩沖液pH，分離電壓，溫度、電場電壓及有機修飾劑等因素對硫苷分離與檢測的影響，優(yōu)化了分離檢測技術(shù)，建立高效、簡便、低成本、環(huán)境友好型油菜籽硫苷樣品HPCE-MECC檢測技術(shù)。 在對影響硫苷成分分離檢測的遷移時間、相對遷移時間、峰面積、歸一化峰面積、分離度等因素以及緩沖溶液濃度、pH值、表面活性劑濃度、有機修飾劑(正丙醇、異丙醇等)、電場電壓和溫

5、度等進(jìn)行系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，優(yōu)化篩選出HPCE-MECC法檢測硫苷條件為：緩沖液成分和濃度為 18mmol/L 四硼酸鈉，30mmol/L 磷酸氫二鈉；50mM CTAB，pH 7.0，電壓-20KV，溫度30℃。采用該技術(shù)條件，油菜籽中完整硫苷可在15-18min內(nèi)得到完全分離。由于膠束電動高效毛細(xì)管電泳分析硫苷，不需使用有機溶劑，不需使用價格昂貴的硫酸酯酶，為油菜籽硫苷組分與含量的精確測定提供了高效低成本環(huán)境友好型檢測技術(shù)手段。

6、 3.甘藍(lán)型油菜硫苷含量及組分分析依據(jù)甘藍(lán)型油菜硫苷含量，首次系統(tǒng)研究了高硫、中硫和低硫中國甘藍(lán)型油菜種子硫苷含量與組分，對高、中、低類型油菜硫苷組分標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)及硫苷分量與總量關(guān)系的分析結(jié)果表明：高硫苷、中硫苷甘藍(lán)型油菜樣品中主要組分是脂肪族2-羥基-3-丁烯基硫苷和3-丁烯基硫苷，其比例在兩種類型中分別為81.16％和73.92％，變異系數(shù)最小，僅為12.4和16.6，是高硫甘藍(lán)型油菜中穩(wěn)定的硫苷主導(dǎo)成分；低硫苷甘藍(lán)型油菜中主

7、要組分是吲哚族4-羥基-3-吲哚甲基硫苷和芳香族苯乙基硫苷，含量為7.3μmol/g和4.3μmol/g，占硫苷總量的51.52％。4-羥基-3-吲哚甲基硫苷在低硫苷甘藍(lán)型油菜樣品中變異系數(shù)最小，在高、中、低不同硫苷含量油菜中平均含量變化為6.04-7.98μmol/g，而在高硫苷油菜中僅占硫苷總量的5.34％，低硫苷菜籽中含量高達(dá)32.31％，是低硫苷油菜硫苷的主要組分。芳香族苯乙基硫苷在低硫苷油菜籽中含量高于在高硫苷油菜籽中含量，是

8、低硫苷油菜育種品質(zhì)改良中進(jìn)一步降低硫苷含量的限制因子。 本研究通過甘藍(lán)型油菜籽樣品硫苷總量及分量成分的測定，分析了甘藍(lán)型油菜籽不同硫苷總含量水平下各硫苷成分組成及含量的變化規(guī)律，探明了高硫苷油菜籽和低硫苷油菜籽中硫苷分量的主導(dǎo)成分及含量差異。 4.甘藍(lán)型油菜葉片與種子硫苷含量及組分的相關(guān)性甘藍(lán)型油菜葉片硫苷含量變化研究結(jié)果表明，高硫、低硫甘藍(lán)型油菜葉片硫苷含量在不同生育時期變化規(guī)律顯著不同。高硫油菜中油821葉片硫苷苗期

9、含量最高，隨后持續(xù)下降，而低硫材料從越冬到現(xiàn)蕾逐漸升高，薹期降低，初花期又升高，盛花時降到最低。所有供試低硫材料葉片硫苷組分含量與種子硫苷組分含量間相關(guān)性均不顯著，改變?nèi)~片硫苷含量不會顯著影響種子中硫苷含量。脂肪族硫苷含量是高硫、低硫材料葉片硫苷總含量差異的主要成分。本研究首次研究了中國甘藍(lán)型油菜不同生育時期葉片硫苷總量和分量的變化規(guī)律，系統(tǒng)研究分析了葉片與種子硫苷含量及組分的相關(guān)性，為雙低油菜特別是菜.油兼用型油菜品種選育和油菜抗病、

10、抗蟲性品種改良提供理論基礎(chǔ)。 5.吲哚硫苷降解產(chǎn)物對S<,180>移植性腫瘤抑制效應(yīng)研究吲哚硫苷是甘藍(lán)型低硫油菜種子和葉片中主要成分硫苷成分，研究結(jié)果表明吲哚硫苷降解產(chǎn)物對S<,180>移植性腫瘤有明顯的抑制作用，能促進(jìn)癌細(xì)胞變性壞死，增加小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，激發(fā)機體對癌組織進(jìn)行包裹，阻止癌細(xì)胞擴散，并且不具有化療藥物的毒副作用，因而對實體瘤的防治具有良好的應(yīng)用前景。本研究成果不僅拓寬了油菜品質(zhì)改良的范圍，為合理開發(fā)利用油菜資源