淫羊藿苷對COPD模型炎癥反應的影響和機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  本論文通過體內和體外實驗來研究淫羊藿苷對慢性阻塞性肺疾?。–OPD)模型(動物和細胞模型)的抗炎效果,來探討淫羊藿苷抑制慢性阻塞性肺疾病炎癥的機制。
  材料與方法:
  1.體內實驗:COPD體內炎癥模型是以脂多糖(LPS)氣管滴注加香煙煙霧暴露的方法刺激SD大鼠而建立的。40只SD大鼠隨機分為4組:正常組,COPD模型組,強的松組,淫羊藿苷組。HE染色切片觀察各組大鼠肺組織;流式細胞術檢測各組大鼠外周血

2、CD4+,CD8+T細胞的比例;用微板酶標法和分光光度計測定各組大鼠外周血SOD,NO和iNOS的含量;用酶標記免疫吸附測定法(ELISA)檢測各組大鼠血清和肺泡灌洗液中的TNF-α和IL-10的水平;用免疫組化檢測肺組織中MMP-9,MMP-2和TIMP-1的表達情況。
  2.體外實驗:以LPS刺激大鼠肺泡巨噬細胞(NR8383)建立細胞炎癥模型,細胞分為3組:對照組,LPS組,淫羊藿苷組。采用微板酶標法和分光光度計測定各組細

3、胞培養(yǎng)上清SOD,NO和iNOS含量;用ELISA法檢測各組細胞培養(yǎng)上清液中細胞因子TNF-α,IL-10和MMP-9的濃度;采用蛋白質印跡法(westemblot)檢測 LPS組和淫羊藿苷組中 MMP-9,MMP-2,TIMP-1,MAPK的蛋白水平,以及p38抑制劑SB203580預處理后,MMP-9蛋白水平的變化。
  結果:
  1.體內實驗:COPD模型組肺組織HE染色光學顯微鏡下觀察到肺泡壁和肺間隔炎性細胞浸潤,

4、肺間隔斷裂,融合,肺實質破壞,形成廣泛性肺氣腫,強的松組和淫羊藿苷組大鼠 COPD病理改變較模型組明顯減輕,淫羊藿苷組接近于正常組。COPD模型組大鼠外周血淋巴細胞CD8+T細胞比例比正常組高,淫羊藿苷組與模型組比較,比例下降(p<0.05)。模型組的CD4+/ CD8+T細胞比值明顯低于正常對照組(p<0.05),而淫羊藿苷干預逆轉了這種結果。淫羊藿苷顯著地抑制了由于煙霧暴露/LPS刺激大鼠而產生的TNF-α,NO和iNOS,同時提高

5、了抑炎因子IL-10的水平。與正常組比較,COPD模型組大鼠肺組織中MMP-9和TIMP-1表達增加(p<0.05),淫羊藿苷組大鼠肺組織中MMP-9和TIMP-1表達趨向于正常組。
  2.體外實驗:淫羊藿苷顯著地抑制了由于LPS激活的NR8383細胞而產生的TNF-α, NO和iNOS,同時提高了抑炎因子IL-10的水平。Western blotting結果顯示出淫羊藿苷上調了由于LPS引起的MMP-9,TIMP-1, p-p

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