1、目的:
　　了解陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH)患者WT1基因mRNA的表達水平，探討WT1基因異常表達在陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)發(fā)病機制中的作用。
　　方法:
　　研究對象為天津醫(yī)科大學總醫(yī)院自2013年3月至2013年12月新診斷的PNH患者11例（其中經典型8例，AA-PNH患者3例）及正常對照8名。采用半定量RT-PCR方法檢測

2、CD59+ BMMNC及CD59-BMMNC、正常對照BMMNC中WT1 mRNA的表達情況，并分析其臨床意義。體外培養(yǎng)PNH患者骨髓CD59-細胞，采用RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術敲低WT1基因的表達，應用流式細胞術檢測敲低前后細胞周期、凋亡等生物學特征變化，進一步探討WT1基因在PNH發(fā)病機制中的作用。
　　結果:
　　1.PNH患者CD59-細胞組、CD59+細胞組及正常對照組WT1 m

3、RNA的相對表達量分別為（1.06±0.12）、（0.90±0.12）和（0.86±0.05），CD59-細胞組明顯高于PNH CD59+細胞組和正常對照組（P值均＜0.05），而PNH CD59+細胞組和正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。PNH患者WT1 mRNA的相對表達量與CD59-細胞數量呈顯著正相關(r=0.490，P＜0.05)，而與CD59+細胞數量無明顯相關性。
　　2.PNH患者骨髓CD59-細胞轉

4、染siRNA靶向基因WT1后，WT1基因被敲低，其mRNA表達水平下降;PNH患者空白對照組和siRNA-scr轉染組細胞G0/G1期分別（92.73±3.71）％和(93.06±4.14)％，S期分別（6.99±3.61）％和（6.73±4.08）％;siRNA-WT1轉染組細胞G0/G1期為（94.46±3.71）％，S期細胞減低為（5.40±3.55）％，該組G0/G1期和S期比例與空白對照組和siRNA-scr轉染組比較差別均具

5、有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。siRNA-WT1轉染組細胞凋亡率較空白組和siRNA-scr轉染組凋亡率明顯增加[（35.91±22.36）％VS（26.12±17.10）％VS(27.39±18.99)％](P＜0.05)
　　結論:
　　PNH患者CD59-細胞中WT1基因高表達，提示該基因對PNH異?？寺】赡芷鸬酱龠M其增殖的作用。siRNA-WT1能有效抑制PNH患者CD59-細胞中WT1基因的表達，WT1基因表達下降