1、目的:1.觀察瘦素經(jīng)轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)途徑促進 SD大鼠肝星狀細胞(HSC-T6)的增殖。2.觀察TGF-β1受體特異性拮抗劑SB-431542抑制外源性瘦素對肝星狀細胞的增殖。
　　方法:試驗分為對照組、不同濃度的瘦素(50、100、和300ng/ml)組及不同濃度的SB-431542(0.5、1.0、10.0umol/ml)作用于瘦素100ng/ml誘導的HSC-T6細胞組,分別作用于肝星狀細胞不同時間(24h、

2、48h、72h)組,應用 MTT法檢測瘦素對肝星狀細胞的增殖作用;采用 RT-PCR法檢測肝纖維化指標aI型前膠原a1(ColIa1)mRNA和肝星狀細胞活化指標a-平滑肌肌動蛋白(a-SMA)mRNA的變化;用間接免疫熒光來觀察aI型前膠原a1(ColIa1)蛋白、a-平滑肌肌動蛋白(a-SMA)蛋白的表達;用放射免疫來測定肝纖維化指標Ⅲ型膠原(PCⅢ),層粘連蛋白(LN)的表達。
　　結(jié)果:1.MTT結(jié)果顯示瘦素可以促進肝星狀

3、細胞增殖,并存在劑量和時間依賴關(guān)系,以瘦素100ng/ml,48h時的最明顯,增殖率為81.3％;2.瘦素組與對照組相比,a1(ColIa1)mRNA、a-SMAmRNA、a1(ColIa1)蛋白、a-SMA蛋白、PCⅢ、LN的表達呈遞增趨勢,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05),并存在劑量、時間依賴性,以瘦素100ng/ml,48h時最明顯;3.不同濃度SB-431542干預瘦素誘導 HSC-T6組與瘦素100ng/ml組相比, a1(C

4、olIa1)mRNA、a-SMAmRNA、a1(ColIa1)蛋白、a-SMA蛋白、PCⅢ、LN的表達隨濃度的增加,時間的延長呈遞減的趨勢,各指標之間的差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05),并以10.0umol/ml,48小時為最明顯。
　　結(jié)論:1、瘦素可以促進肝星狀細胞的增殖,有劑量、時間依賴性。2、SB-431542可明顯抑制外源性瘦素對肝星狀細胞的增殖作用,有劑量、時間依賴性,故運用 SB-431542可能對防治肝纖維化有效,