1、研究目的
　　 本實驗采用體外分離、培養(yǎng)并不同濃度的超順磁性氧化鐵(superparamagnetic iron oxid，SPIO)標記骨髓基質細胞(bone marrow stemcells，BMSCs)，旨在明確不同濃度SPIO對BMSCs的活性影響；觀察磁標記BMSCs在體MR成像時各序列特征，以期求得活體監(jiān)測SPIO標記細胞的優(yōu)選序列；動態(tài)觀察創(chuàng)傷性腦損傷(traumatic brain injury，TBI)大鼠損傷

2、對側細胞移植后神經(jīng)功能恢復及MR活體成像特點及規(guī)律，為臨床干細胞移植治療創(chuàng)傷性腦損傷的療效觀察與新方法開創(chuàng)提供依據(jù)。
　　 實驗方法
　　 1.BMSCs的培養(yǎng)及鑒定：采用全骨髓貼壁法對BMSCs進行常規(guī)培養(yǎng)、純化，觀察細胞光鏡及透射電鏡下的形態(tài)；對所獲得的細胞進行表面抗原(CD34、CD44、CD45、CD105)檢測；采用DMSO+BHA誘導進行神經(jīng)樣細胞誘導分化，并用免疫組化的方法檢測誘導后細胞神經(jīng)元特異性烯醇化酶

3、(neuronspecific enolase，NSE)、神經(jīng)膠質原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidiacprotein，GFAP)及神經(jīng)上皮干細胞蛋白(Nestin)的表達。
　　 2.標記細胞的鑒定及活性分析：不同濃度SPIO(Resovist)標記BMSCs，普魯士藍染色及電鏡下觀察細胞內鐵，并通過MTT法分析不同濃度Resovist對細胞活性的影響。
　　 3.標記細胞的腦內立體定位注射及

4、MR活體示蹤：采用Feeney's自由落體方法制備大鼠TBI模型，實驗動物共分4組，A組：TBI后損傷對側移植SPIO標記BMSCs；B組：TBI后移植未標記BMSCs；C組：TBI后移植純培養(yǎng)液；D組(假手術組)：僅切開頭皮不進行損傷和移植。移植后不同時間點(1天、1周、2周及4周)進行MR的TSE：T1WI、T2WI，GRE：T2*WI及磁敏感加權(susceptibility weighted imaging，SWI)序列動態(tài)觀察

5、其分布及遷徙。并經(jīng)神經(jīng)功能評分(參照平衡木試驗的評分方法)對大鼠進行功能測試，評價細胞移植的療效，最后經(jīng)組織學檢查驗證標記細胞在腦內的存活及遷徙。
　　 結果：
　　 1.全骨髓貼壁法培養(yǎng)至P3代后，光鏡下細胞表現(xiàn)為均勻分布的梭形成纖維樣細胞；透射電鏡下表現(xiàn)為兩種不同的結構類型；免疫細胞化學染色檢測結果顯示CD34、CD45表達陰性，CD44及CD105表達陽性；神經(jīng)方向誘導6h后，倒置相差顯微鏡下細胞呈神經(jīng)元樣細胞形態(tài)

6、，免疫細胞化學染色NSE、GAFP、Nestin呈陽性表達。
　　 2.Resovist標記BMSCs后，光鏡下可見胞漿內散在分布的棕黃色顆粒；普魯士藍染色胞質內可見陽性藍色顆粒；電鏡觀察可見標記BMSCs胞質內含有許多包裹鐵顆粒的囊泡。MTT比色試驗結果顯示14μg～112μg Fe/ml培養(yǎng)液對細胞活性沒有影響。
　　 3.BMSCs移植后1天、1周、2周及4周的神經(jīng)功能評分顯示A組和C組、B組和C組評分差異有統(tǒng)計學

7、意義，而A組和B組評分差異無統(tǒng)計學意義。MR檢查結果顯示A組實驗動物注射區(qū)在TSE：T1WI、T2WI，GRE：T2*WI及SWI四個序列均可顯示低信號，以T2，WI及AWI信號丟失明顯，其中SWI最敏感。且在2周及4周時的SWI序列上更清楚的顯示線樣低信號沿胼胝體逐漸向損傷區(qū)遷移，組織普魯士藍染色亦證實標記BMSCs沿胼胝體向對側的遷移。
　　 結論：
　　 1.無需轉染介質，Resovist能夠高效的進入BMSCs胞