中國(guó)番茄黃化曲葉病毒（TYLCCNV）遺傳標(biāo)記突變體的構(gòu)建.pdf_第1頁(yè)
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1、雙生病毒科病毒是植物病毒中唯一具有單鏈環(huán)狀DNA(single stranded DNA，ssDNA)病毒。已有的研究發(fā)現(xiàn)雙生病毒的種群結(jié)構(gòu)類似準(zhǔn)種(quasispecies)，而且重組是雙生病毒進(jìn)化的重要驅(qū)動(dòng)力。為研究雙生病毒準(zhǔn)種種群在單個(gè)植株內(nèi)系統(tǒng)擴(kuò)散和植株間傳播過程中的變化以及重組頻率，需要一個(gè)遺傳標(biāo)記的病毒群體。本論文以已有的中國(guó)番茄黃化曲葉病毒(TYLCCNV)Y10侵染性克隆(TYLCCNV-Y10 pBinPLUS-1.7

2、A)為材料，通過overlap PCR技術(shù)，在不改變編碼氨基酸的前提下分別在基因組的IR5區(qū)第45位堿基以T替代C，創(chuàng)造含MluⅠ酶切位點(diǎn)；AV2區(qū)第277位堿基以T替代為A，以及第281位堿基A替代為C，創(chuàng)造Sac Ⅰ酶切位點(diǎn)；AV1區(qū)第575位堿基以C替代G，創(chuàng)造Mlu Ⅰ酶切位點(diǎn)；AC1區(qū)第1675位以堿基A替代為G，創(chuàng)造Sma Ⅰ酶切位點(diǎn)的突變體4個(gè)。酶切和測(cè)序結(jié)果表明以上酶切位點(diǎn)已經(jīng)被正確引入，接種本氏煙的結(jié)果初步顯示，帶有分

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